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研究背景和目的:
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，它的发病率在西方国家中占女性恶性肿瘤的第一位。近年来，中国乳腺癌的发病率逐渐出现上升且出现年轻化的趋向，已严重影响到广大女性的身心健康和生活质量。乳腺癌分型很多，其中三阴性乳腺癌（TNBC）占比约10%~15%。进展期或转移性TNBC相比其他类型乳腺癌预后较差，中位生存期在18个月左右甚至更短。CXCR4是一种细胞膜上的趋化因子受体，其胞内段与G蛋白偶连，激发细胞内下游信号通路，调控众多种类的转录因子，触发与凋亡、转移相关的多个事件的发生。本课题组前期的研究显示出在TNBC中趋化因子受体4（CXCR4）表达是高的，可能是女性乳腺癌的一个不良预后因素。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）是一类存在于多数真核生物中，是一种蛋白翻译后的修饰酶，具有很重要的生理功能，其中之一就是在DNA损伤修复过程中的关键作用，PARP-1是PARP基因家族的成员之一。本课题组前期研究发现敲减CXCR4可以增加乳腺癌细胞对顺铂的化疗敏感性。当顺铂化疗敏感时，DNA损伤修复就减少，PARP-1就会下降。我们推测，CXCR4和PARP-1之间存在正相关关系，而PARP-1抑制剂又和肿瘤细胞EMT的过程息息相关。目前CXCR4和PARP-1的相关研究较少，本课题的研究目的是研究CXCR4对PARP-1抑制剂抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化的影响，为乳腺癌临床治疗带来依据。
材料和方法:
1.在TNBC细胞株MDA-MB-231细胞敲减CXCR4作为体外研究对象。
2.CCK8法检测敲减CXCR4，PARP-1抑制剂olaparib、PJ34的半数抑制浓度率（IC50），了解CXCR4和PARP-1抑制剂对细胞增殖能力的影响。
3.划痕实验分析比较敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞迁移情况。
4.Transwell小室观察敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞迁移、侵袭能力的变化。
5.Westernblot技术检测敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞EMT相关蛋白质的影响。
6.实时定量PCR实验检测敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞EMTmRNA表达的影响。
7.临床数据库分析
结果:
1.成功建立MDA-MB-231-shCXCR4稳定表达细胞系，细胞形态有所改变；
2.观察在MDA-MB-231细胞中敲减CXCR4后PARP-1蛋白下降的变化；
3.CCK8实验结果显示敲减CXCR4后，增强olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞的增殖，呈浓度依赖性；
4.划痕实验及Transwell小室结果显示敲减CXCR4后，olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力更显著；
5.Westernblot实验结果显示，敲减CXCR4后，olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞Vimentin表达更显著；
6.实时定量PCR实验结果显示，敲减CXCR4后，olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞Snail2、Vimentin表达更显著；
7.Kaplan-Meierplots数据库分析结果显示高表达CXCR4和PARP-1的乳腺癌病人的复发生存率较低。
结论:
敲减CXCR4后，PARP-1抑制剂能够明显抑制三阴性乳腺癌的上皮-间质转化。
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，它的发病率在西方国家中占女性恶性肿瘤的第一位。近年来，中国乳腺癌的发病率逐渐出现上升且出现年轻化的趋向，已严重影响到广大女性的身心健康和生活质量。乳腺癌分型很多，其中三阴性乳腺癌（TNBC）占比约10%~15%。进展期或转移性TNBC相比其他类型乳腺癌预后较差，中位生存期在18个月左右甚至更短。CXCR4是一种细胞膜上的趋化因子受体，其胞内段与G蛋白偶连，激发细胞内下游信号通路，调控众多种类的转录因子，触发与凋亡、转移相关的多个事件的发生。本课题组前期的研究显示出在TNBC中趋化因子受体4（CXCR4）表达是高的，可能是女性乳腺癌的一个不良预后因素。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）是一类存在于多数真核生物中，是一种蛋白翻译后的修饰酶，具有很重要的生理功能，其中之一就是在DNA损伤修复过程中的关键作用，PARP-1是PARP基因家族的成员之一。本课题组前期研究发现敲减CXCR4可以增加乳腺癌细胞对顺铂的化疗敏感性。当顺铂化疗敏感时，DNA损伤修复就减少，PARP-1就会下降。我们推测，CXCR4和PARP-1之间存在正相关关系，而PARP-1抑制剂又和肿瘤细胞EMT的过程息息相关。目前CXCR4和PARP-1的相关研究较少，本课题的研究目的是研究CXCR4对PARP-1抑制剂抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化的影响，为乳腺癌临床治疗带来依据。
材料和方法:
1.在TNBC细胞株MDA-MB-231细胞敲减CXCR4作为体外研究对象。
2.CCK8法检测敲减CXCR4，PARP-1抑制剂olaparib、PJ34的半数抑制浓度率（IC50），了解CXCR4和PARP-1抑制剂对细胞增殖能力的影响。
3.划痕实验分析比较敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞迁移情况。
4.Transwell小室观察敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞迁移、侵袭能力的变化。
5.Westernblot技术检测敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞EMT相关蛋白质的影响。
6.实时定量PCR实验检测敲减CXCR4前后，olaparib、PJ34对细胞EMTmRNA表达的影响。
7.临床数据库分析
结果:
1.成功建立MDA-MB-231-shCXCR4稳定表达细胞系，细胞形态有所改变；
2.观察在MDA-MB-231细胞中敲减CXCR4后PARP-1蛋白下降的变化；
3.CCK8实验结果显示敲减CXCR4后，增强olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞的增殖，呈浓度依赖性；
4.划痕实验及Transwell小室结果显示敲减CXCR4后，olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力更显著；
5.Westernblot实验结果显示，敲减CXCR4后，olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞Vimentin表达更显著；
6.实时定量PCR实验结果显示，敲减CXCR4后，olaparib、PJ34抑制MDA-MB-231细胞Snail2、Vimentin表达更显著；
7.Kaplan-Meierplots数据库分析结果显示高表达CXCR4和PARP-1的乳腺癌病人的复发生存率较低。
结论:
敲减CXCR4后，PARP-1抑制剂能够明显抑制三阴性乳腺癌的上皮-间质转化。