自1981年美国发现世界首例艾滋病患者,至今已死亡2000多万人,仅2003年新感染人数就有500万。目前全世界大约已有5800万人被感染,大约一半为15至24岁的青壮年。我国艾滋病病毒感染者迅猛增长,现已有84万人被感染HIV病毒,已经成为我国当前突出的卫生问题,目前还没有一种HIV疫苗问世,如何高效而迅捷的生产HIV疫苗成为关系人类生命健康的重大问题。应用转基因植物表达HIV疫苗,有其简洁可操作性优势。HIV的壳体蛋白(CA)为病毒核心结构的主要蛋白,在病毒粒子中含量丰富,在HIV病毒的组装和成熟过程中起着至关重要的作用,在HIV的不同亚型间高度保守。野生型的CA以圆柱状颗粒存在,与4个HIV基质蛋白(MA)的氨基酸残基结合就能使CA的形状由圆柱状转至球状,进而增强CA的免疫原性。本研究利用有助于CA形成病毒样颗粒(VLP)结构的MA的最后四个氨基酸残基,与CA融合表达,形成的球状颗粒能够增强CA的免疫原性。枸杞与烟草同属于茄科植物,植物细胞易于遗传转化,安全性性高,利用其再生成植株的形成可进行目的基因的表达。植物细胞作为真核细胞表达体系,可对其表达产物进行糖基化、磷酸化等翻译后加工修饰和装配,从而有利于提高HIV CA疫苗的免疫原性。有报道利用转基因烟草表达的HIV-1的P24蛋白能保持较好的免疫原性。而枸杞作为一种宝贵的中药材,则富含多种对身体有益的成分;而其作为常年生植物其遗传性状更加稳定,所携带基因不易丢失。在没有相应的HIV疫苗问世以前,应用植物表达系统选择性大量安全地表达HIV抗原多肽及众多重组蛋白,研究它们的作用机理及其免疫活性,应对HIV病毒的高度变异性,以制备安全高效的HIV疫苗。我实验室与美国Utah大学的Dr. W.I. Sundquist, Professor合作将影响CA形成球状VLP结构的MA的四个核苷酸序列与CA融合形成MA4-CA,然后将源于水稻的一个富含甘氨酸序列的信号肽(GRP)连接在MA4-CA融合基因的3’端,从而使枸杞中表达的CA疫苗被引导进入根细胞间隙,并从根系不断地分泌到培养液中,由此产生出高纯度的CA疫苗。并在此基础上.进一步明确植物组织表达的CA重组疫苗的免疫原性。为利用转基因枸杞表达成本低廉,更为安全有效的HIV重组疫苗提供依据。研究目的:利用本实验室构建好的分泌型植物表达载体,通过根癌农杆菌对枸杞进行遗传转化,筛选阳性克隆,从基因水平及蛋白水平鉴定转基因枸杞。应用所提取转基因枸杞蛋白免疫BALB/c小鼠,进行其免疫原性研究。以期应用转基因枸杞表