低氧对人牙周膜干细胞骨向分化的影响

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目的采用组织块法培养牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),分别在低氧和常氧条件下培养HPDLSCs,检测常氧和低氧情况下HPDLSCs的骨向分化潜能是否有差异。方法首先采用组织块法体外分离培养HPDLSCs,并在镜下观察HPDLSCs的形态。分别在常氧和低氧条件下培养HPDLSCs,低氧组的细胞置于含2%O2、5%CO2和93%N2的低氧培养箱中培养,常氧组的细胞置于含20%O2、5%CO2和75%N2的常氧培养箱培养,分别在培养6h,12h,24h,48h后检测其增殖能力以及碱性磷酸酶(ALP)活性,并通过荧光定量PCR检测低氧培养的HPDLSCs中骨钙素(OCN)、低氧诱导因子1α(Hif-1α)、碱性磷酸酶(ALP)、以及成骨相关基因核心结合因子(Runx-2)等基因的表达变化;通过Westernblot法检测低氧培养的HPDLSCs中Runx-2、Hif-1α等蛋白的表达变化。结果培养7~15 d时镜下可见从组织块周围爬出的长梭形HPDLSCs。与常氧培养的HPDLSCs相比,低氧组的HPDLSCs的增殖能力略高于常氧组;相比常氧组,低氧组的HPDLSCs的ALP活性高于常氧组,但低氧培养48h后其ALP活性开始下降;荧光定量PCR结果显示,低氧组中OCN、Hif-1α、ALP和RUNX-2等成骨基因的表达明显升高常氧组,但低氧培养48h后相关基因的表达下降;Westernblot结果显示,低氧培养48h内的HPDLSCs的成骨能力高于常氧组,但低氧培养48h则抑制其成骨能力。结论低氧可以增强HPDLSCs的增殖能力;48h内低氧可显著增强HPDLSCs骨向分化作用,24h的时候成骨能力最强,48h则开始抑制其成骨能力。HPDLSCs可以作为种子细胞应用于组织工程,修复牙周病导致的骨缺损和再生牙周组织。
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