【摘 要】
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宫颈癌是病死率居全球妇女癌症死亡率第2位的女性疾病,研究表明16型人乳头状瘤病毒癌蛋白E7(HPV16E7)在宫颈癌中起着关键作用。由于E7不在正常细胞中表达,它已成为研究HPV相关癌
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宫颈癌是病死率居全球妇女癌症死亡率第2位的女性疾病,研究表明16型人乳头状瘤病毒癌蛋白E7(HPV16E7)在宫颈癌中起着关键作用。由于E7不在正常细胞中表达,它已成为研究HPV相关癌症治疗的重要靶标之一。传统的宫颈癌治疗方法存在疗效低、副作用大等局限性,因此研究发展新的治疗策略十分迫切。本研究旨在探讨新的宫颈癌治疗方法,以HPV16E7为靶标,利用噬菌体筛选出活性拮抗肽,并深入研究其抗肿瘤功能和作用机制,以期为临床用药开发提供实验基础和理论依据。论文研究筛选获得一个全新的HPV16E7拮抗肽Pep-7,并在细胞生物学和动物实验水平系统研究了其体内外抗肿瘤功能和作用机理。论文首先验证了Pep-7的体外功能。通过竞争性ELISA方法证实其结合HPV16E7的高亲合力和特异性。同时该肽在MTT和克隆形成实验中显示出良好的抗HPV16阳性肿瘤细胞增殖的功能。而后在机理研究中,运用一系列的细胞生物学、分子生物学和生物化学实验方法,揭示了Pep-7主要从两条途径抑制HPV16阳性的癌细胞的增殖:一是通过促进HPV16E7的降解,破坏E7/pRb复合物的结合,从而抑制E7介导的pRb蛋白降解,并恢复pRb抑制转录因子E2F活性的功能,调控细胞周期,诱导细胞周期G1期阻滞;二是通过破坏E7蛋白功能,促进胞内p53蛋白的积累,上调p53下游因子如p21的表达而诱导细胞凋亡。最后在动物移植瘤实验中进一步证实该肽具有显著的体内抗肿瘤疗效,其抑瘤机制在继细胞试验之后,在活体水平得到了进一步的验证。本论文研究表明,获得的HPV16E7拮抗肽具有良好的抗肿瘤活性,有望开发成为治疗HPV16-相关肿瘤的新型候选药物。
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