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目的:克隆并表达埃及伊蚊（Aedes aegypti）（广东电白株）Serpin23蛋白,并对其进行酶活性检测,以探讨其可能具有的生物学功能。方法:设计基因特异性引物,采用PCR技术扩增埃及伊蚊广东电白株serpin23基因成熟肽序列,并将其克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1和麦胚无细胞表达（Wheat Germ Cell-free）载体pEU-E01-His-TEU-MCS-N2。将测序正确的原核表达重组质粒pGEX-4T-1-Serpin23（rSerpin23）转入表达菌BL-21（DE3）中后经异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达;重组质粒pEU-Serpin23（rpEU-Serpin23）按照麦胚无细胞表达试剂盒说明书进行表达;构建pcDNA3.1-Serpin23重组质粒,将其转染到293T细胞,在DMEM培养基培养48h后收集细胞及上清。表达产物经SDS-PAGE和免疫印迹（western blotting）进行鉴定。鉴定后的蛋白经GSTrapTMFF和Ni-NTA亲和层析柱进行纯化。采用手工法检测rSerpin23对人全血部分凝血酶原时间（prothrombin time,PT）,凝血酶时间（thrombin time,TT）及凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）的影响。最后采用发色底物法检测rSerpin23、rpEU-Serpin23和pcDNA3.1-Serpin23蛋白对胰蛋白酶的抑制作用。结果:Serpin23序列全长为1254 bp,具有信号肽序列,生物信息学分析显示其具有Serpin结构域。PCR扩增获得其成熟肽序列,将其克隆入pGEX-4T-1和pEU-E01-His-TEU-MCS-N2载体,经PCR、双酶切及DNA测序结果均表明rSerpin23重组质粒构建成功。重组质粒测序结果显示,Serpin23成熟肽序列长1197 bp,编码399个氨基酸。与网上序列（登录号:DQ439995）进行比对,在第904位置的T碱基突变成C碱基,为同义突变。将构建好的重组质粒rSerpin23转入大肠杆菌BL-21（DE3）中经IPTG诱导后获得可溶性rSerpin23蛋白;重组质粒pEU-Serpin23在麦胚无细胞表达系统中成功的表达出了rpEU-Serpin23重组蛋白;重组质粒pcDNA3.1-Serpin23转染入293T细胞后在细胞中检测到重组蛋白表达。经Western blotting证实获取的重组蛋白rSerpin23、rpEU-Serpin23和pcDNA3.1-Serpin23是目的蛋白。在1.0μM rSerpin23作用下,PT、TT和APTT分别为13.29 S、15.34 S和36.72 S,均无延时效应。此外,酶标仪动态检测产物吸光度值发现,rSerpin23、rpEU-Serpin2和pcDNA3.1-Serpin23重组蛋白均不能够抑制胰蛋白酶活性。结论:三种方法均成功获得埃及伊蚊（广东电白株）Serpin23重组蛋白,未检测到其具有抑制胰蛋白酶的活性。