论文部分内容阅读
目的:观察CADM1、IL-6、IL-8在肝郁型哮喘小鼠模型中的表达及柴朴汤干预的影响。方法:选取30只清洁级体重（20±2g）雌性Balb/c小鼠,正常饲养1周,随机分为A-E共5组,各组6只。即正常组（A组）、哮喘组（B组）、肝郁哮喘组（C组）、肝郁哮喘+柴朴汤组（D组）、肝郁哮喘+地塞米松组（E组）。肝郁造模阶段:C、D、E组小鼠行28天随机慢性应激刺激（CUMS）,包括24小时禁水,24小时禁食,镊子夹尾180秒,绑带束缚1小时,4℃游泳5分钟,热环境（45℃）,水平震荡和旋转、昼夜颠倒及噪音干扰2小时,居住环境改变（单笼饲养、鼠笼倾斜、潮湿垫料等）,A、B组小鼠正常饲养。哮喘造模阶段:A组用生理盐水腹腔注射,蒸馏水雾化作为实验对照,D组每次雾化前半个小时给予柴朴汤（1.5g/kg）0.3ml/只注胃,E组每次雾化前半个小时给予地塞米松（1mg/kg）0.3ml/只注胃,A、B、C组予以0.3ml/只生理盐水注胃。B、C、D、E组小鼠于第1天、第8天经腹腔注射OVA10ug和Al（OH）3400ug混合液0.2ml/只。第21天时,单独将每只小鼠放在自制雾化箱中,保持密闭,用1%OVA雾化吸入进行激发,连续7天,每日雾化1次,每次持续30分钟。最后一次雾化24h后,麻醉并行腹主动脉放血处死小鼠,取小鼠肺组织行HE染色图像分析;WB测CADM1、IL-6、IL-8在小鼠肺组织中的表达;实时荧光定量PCR测小鼠肺组织CADM1mRNA、IL-6mRNA、IL-8mRNA的相对表达量。结果:1.HE染色示A组小鼠肺组织气道正常无特殊,未见明显嗜酸性粒细胞及其他炎症细胞浸润;B组小鼠可见支气管管腔出现狭窄,边缘增厚,少许断裂,管腔周围可见炎症细胞浸润,上皮细胞可见增生;C组小鼠肺组织见管腔明显狭窄,边缘不完整,明显增厚,管腔上皮细胞出现明显增生、脱落,周围大量嗜酸性粒细胞浸润;D、E组管腔未见明显增生,管壁基本完整,无明显破坏,周围可见些许炎症细胞。2.WB结果显示哮喘组及肝郁哮喘组CADM1蛋白相对灰阶值均低于正常对照组（P<0.05）,柴朴汤组与地塞米松组CADM1蛋白相对灰阶值均高于肝郁哮喘组（P<0.01）;哮喘组及肝郁哮喘组IL-6蛋白相对灰阶值均高于正常对照组（P<0.01）,且肝郁哮喘组表达量高于哮喘组（P<0.05）,柴朴汤组与地塞米松组IL-6蛋白相对灰阶值均低于肝郁哮喘组（P<0.01）;哮喘组及肝郁哮喘组IL-8蛋白相对灰阶值均高于正常对照组（P<0.05）,柴朴汤组与地塞米松组IL-8蛋白相对灰阶值均低于肝郁哮喘组（P<0.05）,柴朴汤组与地塞米松组CADM1、IL-6、IL-8蛋白表达无明显差异（P>0.05）。肝郁型哮喘组CADM1与IL-6蛋白相关性分析,P=0.939>0.05,两者无明显相关性;肝郁型哮喘组CADM1与IL-8蛋白相关性分析,P=0.034<0.05,两者呈正相关。3.实时荧光定量PCR显示哮喘组及肝郁哮喘组CADM1mRNA的相对表达量均低于正常组（P<0.01）,且肝郁哮喘组表达量低于哮喘组（P<0.05）,柴朴汤组与地塞米松组CADM1mRNA的相对表达量均高于肝郁哮喘组（P<0.01）;哮喘组及肝郁哮喘组IL-6mRNA的相对表达量均高于正常组（P<0.05）,且肝郁哮喘组表达量高于哮喘组（P<0.01）,柴朴汤组及地塞米松组IL-6mRNA的相对表达量均低于肝郁哮喘组（P<0.01）;哮喘组及肝郁哮喘组IL-8mRNA的相对表达量均高于正常组（P<0.01）,且肝郁哮喘组表达量高于哮喘组（P<0.01）,柴朴汤组及地塞米松组IL-8mRNA的相对表达量均低于肝郁哮喘组（P<0.01）。柴朴汤组CADM1mRNA相对表达量高于地塞米松组（P<0.01）,柴朴汤组IL-6、IL-8mRNA相对表达量低于与地塞米松组（P<0.05,P<0.01）。肝郁型哮喘组CADM1mRNA与IL-6mRNA相关性分析,P=0.646>0.05,两者无明显相关性;肝郁型哮喘组CADM1mRNA与IL-8mRNA相关性分析,P=0.19>0.05,两者无明显相关性。结论:1.肝郁型哮喘组小鼠CADM1表达下调,IL-6、IL-8表达上调。2.柴朴汤可上调CADM1,下调IL-6、IL-8,减轻肝郁型哮喘气道炎症因子浸润,缓解哮喘症状。