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目的：本实验旨在研究胰蛋白酶对离体的人体外周血中单核细胞释放细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6功能的影响，为从胰酶，尤其是胰蛋白酶与细胞因子的关系方面，探讨AP病程中细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6生成并释放的机制，为研究急性胰腺炎如何由胰腺的局部病损发展成为全身炎症反应综合征提供新思路。 方法：用离心分离技术分离人外周血单核细胞，调整单核细胞悬液浓度为2.5×10~5／ml。1、将每个研究对象外周血单核细胞分成九个不同浓度的处理组：设定胰蛋白酶作用单核细胞的时间为4.5～5.0小时，将单核细胞悬液分成九份，每份250ul，分别加入0至16ul浓度为0.25％的胰蛋白酶生理盐水溶液，调整混悬液的PH值为7.40～7.45，置培养箱中培养，取上清液100ul，用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定上清液中细胞因子TNF-α、IL-Iβ、IL-6浓度。2、将每个研究对象外周血单核细胞分成九个不同时间的处理组：设定单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度为15或20ug／ml，将单核细胞悬液分成九等份，每份250ul，加入浓度为0.25％的胰蛋白酶生理盐水溶液6ul，调整混悬液的PH值至7.40～7.45，置培养箱中培养，于2小时至48小时9个时间段，分别取出1份混悬液，收集上清液100ul，用ELISA方法分别测定上清液中TNT-α、IL-6 中文拍要的含量。3、设置对照组，用ELISA的方法测定对照组上清液中IN＊－－J的含量或将混悬液混匀，用2％台盼蓝染液染色，计数活细胞数。 结果：1胰蛋白酶对人外周血单核细胞悬液中INI：．a浓度的影响：1．1人体外周血单核细胞在不同浓度的胰蛋白酶作用下，其细胞悬液中TNF－口的浓度不同（见Tab．l人 单核细胞悬液中TNF－口的浓度随着细胞悬液中胰蛋白酶浓度的升高而升高，在单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度为 15ug／ml时，细胞悬液中的 TN’F－。浓度达到最大值u34．15士21．04）p咖1；此后虽然单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度继续升高，细胞悬液中的TNT儿浓度却呈逐渐下降的趋势，在单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度为40ug／ml时，细胞悬液中的 1’i－儿浓度下降至07．75上19．50）Pg／ml。各组间单核细胞悬液中 T’i’－儿的浓度有显著差异巾的．05）（见h1人1．2胰蛋白酶对人外周血单核细胞作用时间的长短对单核细胞悬液中TNFJ浓度的影响（见Tab二人在设定单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度为 15ug／Inl的惰况下，细胞悬液中 T’i－川的浓度随着胰蛋白酶作用时间的延长而升高，在胰蛋白酶刺激因素作用20个小时后，单核细胞悬液中INF－口的浓度达最大值 （42＊5士98．35）Pg／Inl，此后虽然胰蛋白酶刺激因素作用的时间继续延长，细胞悬液中的TNI7儿的浓度却不随着作用时间的延长而继续升高，反而呈逐渐下降趋势，在胰蛋白酶刺激因素作用48个小时后，细胞悬液中TNF－。的浓度下降至（62＊5士川．95）pg／ml。除 36 ’J＼时处理组与48 ’J’时处理组间细胞悬液中TNFJ的浓度比较无显 2 中文摘要 著差异外，其余各不同时间处理组间单核细胞悬液中 ’l’NF儿的浓度比较有显著差异巾卅．05）（见Fig．2人2胰 蛋白酶对人外周血单核细胞悬液中fi－lp浓度的影响： 2．l人体外周血单核细胞在不同浓度的胰蛋白酶作用下， 其细胞悬液中ILJfl的浓度不同（见Tab．3人单核细胞悬 液中IL－lp浓度随着细胞悬液中胰蛋白酶浓度的升高而 升高，在单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度为15U咖l时，细 胞悬液中的 ILJ 浓度达到最大值门02．7上 25．97雌咖l； 此后虽然单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度继续升高，细胞悬 液中的ILJ 浓度却呈逐渐下降的趋势，在单核细胞悬液 中胰蛋白酶浓度为40fig／ffil时，细胞悬液中的ILJp浓度 下降至历2．7土 14．l）p咖l，除 3 ollg／ffil胰蛋白酶处理组 与40if咖1胰蛋白酶处理组间细胞悬液中IL1 的浓度比 较无显著差异外，其余各不同浓度的胰蛋白酶处理组间单 核细胞悬液中IL－互p的浓度比较有显著差异中们．05） （见＊3人3胰蛋白酶对人外周血单核细胞悬液中1卜6 浓度的影响：3．l人体外周血单核细胞在不同浓度的胰蛋 白酶作用下，其细胞悬液中IL－6的浓度不同（见Tab．4人 单核细胞悬液中的IL乃浓度随着细胞悬液中胰蛋白酶浓 度的升高而升高，在单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度为 20fig／Inl时，细胞悬液中的 IL＊浓度达到最大值门引士 5020）pg／ml；此后虽然单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度继 续升高，细胞悬液中的IL6浓度却呈逐渐下降的趋势， 在单核细胞悬液中胰蛋白酶浓度为 40fig／rnl时，细胞悬液 中的＊6浓度下降至门7．1士8．89）pg／thl，除3oUg／llil胰 蛋白酶处理组与 40fig／llil胰蛋白酶处理组间细胞悬?