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心脏死亡器官捐献(DCD)在器官移植中的地位愈发重要,对缓解器官短缺有着极其重要的作用。但DCD供肾不可避免会经历一个热缺血过程,导致移植术后效果不理想,因此,怎样减轻热缺血损伤已成为目前的研究热点。本研究首先对经典的大鼠肾热缺血损伤建模方法上加以改良,成功建立了简单、稳定的肾脏热缺血损伤模型,模拟临床上DCD供肾的热缺血损伤。然后在高渗枸橼酸盐嘌呤液(HCA)液中加入了脂质体前列腺素E1(Lipo-PGE1),并予以低温持续灌注大鼠热缺血损伤的肾脏2小时。通过对比观察其组织形态学的改变,分子生物学指标的检测,来验证Lipo-PGE1的持续低温灌注对大鼠肾热缺血损伤的保护作用;最后,通过检测氧化应激的相关指标来初步探讨Lipo-PGE1减轻热缺血损伤的机制。本研究具体分两个部分阐述。第一部分:SD大鼠肾脏热缺血损伤模型的构建目的:在传统的阻断肾蒂或肾动脉法建立肾脏热缺血损伤模型的基础上加以改良,建立简单可靠的大鼠肾脏热缺血模型,为下一阶段的大鼠缺血再灌注后的肾脏移植奠定基础。方法:利用SD大鼠右肾动脉开口位置比左肾动脉高的解剖特点,先在双肾动脉之间,通过无创微血管夹闭腹主动脉,建立左肾热缺血损伤模型,此时右肾血供不受影响。待左侧肾脏结扎离体后,再通过结扎阻断双肾动脉水平上方处的腹主动脉,建立右肾热缺血损伤模型。双肾热缺血建模完成后,在大鼠腹主动脉处予以插管灌注,肉眼观察各阶段肾脏的颜色变化。结果:两阶段共经过70例次的动物实验,能够建立稳定的大鼠肾脏热缺血损伤的模型。第二阶段(40例次)建模,平均手术操作时间:90±20min,手术成功率:78%(31/40),比第一阶段平均手术操作时间:115±25min,手术成功率:43%(13/30)有明显提高,第二阶段SD大鼠肾脏热缺血损伤后,肉眼观呈紫红色,灌注后基本能达到全面黄棕色。结论:改良的大鼠肾脏热缺血损伤建模法能达到可靠热缺血损伤要求,并且还具有简便实用、手术成功率高等优点,是SD大鼠热缺血损伤及缺血再灌注模型的理想术式。第二部分:Lipo-PGE1对SD大鼠肾脏热缺血损伤的保护作用目的:探讨低温持续灌注含Lipo-PGE1的HCA液对SD大鼠肾脏热缺血损伤后的保护作用。方法:在SD大鼠肾脏热缺血建模成功的基础上,双肾随机分成A、B两组,其中A组:Lipo-PGE1+HCA灌注液对SD大鼠肾脏持续低温灌注2h,B组:0.9%NaCl+HCA灌注液对SD大鼠肾脏持续低温灌注2h;灌注完成后对A、B两组肾脏切下离体行以下指标检测:(1)HE染色病理学检查;(2)分光光度法检测MDA及SOD;(3)蛋白印迹法检测KIM-1及IL-8的表达水平。结果:相比对照组,实验组病理结果显示;HE染色下,细胞坏死程度减轻,炎性细胞浸润减少,微循环中血栓减少;分光光度法检测显示,实验组、对照组SOD活性分别为652.59±52.31 U/mg,237.86±19.95 U/mg;MDA浓度实验组、对照组分别为5.82±0.83nmol/mg,12.53±1.61 nmol/mg,差异具有统计学意义。蛋白印记结果表明与对照组相比,实验组肾脏损伤指标分子KIM-1、炎性因子IL-8表达降低。结论:1、持续低温灌注含Lipo-PGE1的HCA液,可以有效缓解肾脏较长时间热缺血引起的损伤,提高肾脏保存质量。2、持续低温灌注含Lipo-PGE1的HCA液,可能是通过减轻氧自由基对细胞的氧化应激损伤,从而对肾脏热缺血损伤起保护作用。