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背景:心肌凋亡在急性心肌梗死(AMI)的发病机制中有着重要的作用,抑制细胞凋亡目前已成为治疗AMI的重要方法之一。IL28RA是III型干扰素的一个亚基,具有促进细胞凋亡的作用,其机制可能与阻断了 JAK-STAT信号通路的激活,包括下游的PI3K/AKT,MAPK等信号通路有关,也可能与促进细胞本身自噬有关。PI3KCG基因是PI3KI型的催化亚基,与凋亡和自噬也有着密切的关系。本研究以培养的新生SD大鼠心肌细胞为研究对象,采用转染siRNA的方法,利用RNA干扰现象,观察干扰表达IL28RA基因对缺氧复氧的心肌细胞是否有保护作用,并利用在体大鼠心肌梗死模型,利用构建的PI3KCG慢病毒载体,检测PI3KCG基因是否有保护急性心肌梗死的作用。目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)靶向干扰合成白细胞介素28受体α(interleukin 28 receptor alpha,IL28RA)基因对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及其机制,研究含有人磷脂酰肌醇3-激酶p110y(PI3KCG)的慢病毒载体PLV-PI3KCG对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法:1.设计合成干扰合成IL28RA基因表达的三对siRNA(siRNA-6158,siRNA-6160,siRNA-6162),采用脂质体转染原代乳大鼠心肌细胞,实验分为:正常对照组、单纯缺氧复氧组、缺氧复氧+阴性对照转染组、缺氧复氧+siRNA-6158转染组、缺氧复氧+siRNA-6160转染组、缺氧复氧+siRNA-6162转染组。探索siRNA转染心肌细胞的合适浓度,检测心肌细胞的搏动、存活率、培养液中LDH的水平及心肌细胞IL28RA、PI3KCG、TGF-β、BCL-2、BAX蛋白表达。2.采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法,建立急性心肌梗死(AMI)模型,将含有PI3KCG的病毒载体注射在梗死区边缘。实验分为:(1)假手术组(Sham组);(2)AMI 组;(3)AMI + 空载体组(AMI+E 组);(4)AMI +PLV-PI3KCG 组。术后正常饲养10天后做心脏超声观察大鼠心脏结构及功能改变,处死大鼠后取心脏标本,行HE染色观察心肌细胞组织形态学变化,行免疫荧光染色观察梗死区域CD31蛋白表达情况,并检测各组PI3KCG、AKT、TGF-β、BAX、BCL-2、Beclin-1等蛋白表达量变化。结果:1.采用脂质体转染法,siRNA干扰IL28RA基因的浓度在80nmol/L对心肌细胞具有较高的转染效率。与单纯缺氧复氧组比较,siRNA-6158转染组和siRNA-6160转染组的LDH活性明显降低(P<0.05),心肌细胞存活率明显升高(P<0.05),IL28RA蛋白表达明显减少,PI3KCG和TGF-β蛋白量和BCL-2/BAX比例明显增加(P<0.05)。2.大鼠急性心肌梗死手术10天后,与Sham组比较,AMI组和AMI+E组左室舒张末期直径扩大,左室射血分数明显减低,梗死部位心肌细胞坏死严重,成纤维细胞增生明显,伴有炎症细胞浸润;梗死区CD31表达减少;PI3KCG、AKT、TGF-β、BCL-2蛋白表达较减低,BAX、Beclin-1蛋白表达增加;与AMI组和AMI+E组比较,AMI+PLV-PI3KCG组左室舒张末期直径缩小,左室射血分数增加;梗死部位心肌细胞坏死减少,CD31表达增加;PI3KCG、AKT、TGF-β、BCL-2蛋白表达增加,BAX、Beclin-1蛋白表达减少(P<0.05)。各组的室间隔厚度,左室后壁未见明显统计学差异(P>0.05)。结论:1.siRNA干扰IL28RA基因的表达可发挥对缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用。2.转染慢病毒PI3KCG基因的重组慢病毒载体可以通过抑制心肌细胞凋亡和自噬,从而发挥对急性心肌梗死损伤具有保护作用。3.siRNA干扰IL28RA基因可以通过激活PI3K/Akt信号通路,抑制心肌细胞凋亡和自噬而发挥缺氧复氧心肌细胞损伤的保护作用。