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目的构建真核重组表达质粒pc DNA3.4-PEDF-Fc,在HEK293F细胞中表达并纯化,以期获得高表达量、纯度高、具有生物学活性的PEDF-Fc融合蛋白,并体外实验探究PEDF-Fc融合蛋白单用及其与顺铂联合应用对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法采用PCR法扩增PEDF c DNA编码序列,将扩增的PEDF c DNA编码序列与编码人免疫球蛋白Ig G1Fc段恒定区基因的质粒pc DNA3.4-Fc融合,构建pc DNA3.4-PEDF-Fc重组质粒,脂质体法将重组质粒转染到HEK293F细胞中;293F细胞培养上清液过柱,亲和介质Mabselect Su Re纯化Fc融合蛋白,超滤离心管浓缩融合蛋白;BCA法测定融合蛋白的浓度;SDS-PAGE、Western Blot对表达的蛋白进行检测和鉴定;采用MTT法分别检测不同浓度的PEDF-Fc融合蛋白(2.5、5、10、20、40μg/m L)干预48h后对HUVECs和肺癌A549细胞的增殖抑制作用;MTT法检测不同浓度顺铂(0.625、1.25、2.5、5、10μg/m L)联合PEDF-Fc融合蛋白(10μg/m L)对肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测不同浓度PEDF-Fc融合蛋白(10、40μg/m L)对HUVECs凋亡的影响以及不同浓度PEDF-Fc融合蛋白(10、40μg/m L)单用及与顺铂(2μg/m L)联合应用对A549细胞凋亡的影响。结果双酶切鉴定及基因测序结果共同证实成功构建了pc DNA3.4-PEDF-Fc重组质粒,真核表达载体构建成功;BCA法测得PEDF-Fc融合蛋白的浓度约为3.65mg/m L,PEDF-Fc融合蛋白的表达量约为90mg/L;SDS-PAGE法和Western Blot法证实获得了纯度较高的PEDF-Fc融合蛋白,还原性PEDF-Fc融合蛋白的分子量为75KDa左右;MTT结果表明,不同浓度PEDF-Fc融合蛋白(2.5、5、10、20、40μg/m L)对HUVECs具有增殖抑制作用,并且抑制作用随着浓度的增加而增强,具有一定的浓度依赖性(P<0.05);当PEDF-Fc融合蛋白浓度≥5μg/m L时,PEDF-Fc融合蛋白对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,并且具有浓度依赖性(P<0.05);以PEDF起效较明显的浓度干预组(10μg/m L)与不同浓度的DDP联合作用于A549细胞结果显示,联合用药组对A549细胞的增殖抑制作用比单独使用DDP组更明显(P<0.05);流式结果表明,PEDF-Fc干预组(10、40μg/m L)对HUVECs的凋亡率均高于对照组(P<0.05),且高浓度干预组细胞凋亡率明显高于低浓度干预组(P<0.05);相对于PEDF-Fc或者顺铂单用组,PEDF-Fc与顺铂联用对A549细胞具有更强的凋亡促进作用(P<0.05)。结论成功构建了PEDF-Fc融合蛋白真核表达载体,且获得了纯度高、具有生物学活性的PEDF-Fc融合蛋白,为研究PEDF蛋白在肺癌治疗中的作用奠定了基础。结果表明,PEDF-Fc融合蛋白和低剂量顺铂联用对肺腺癌A549细胞的增殖抑制和凋亡促进作用较PEDF-Fc融合蛋白或者顺铂单用强,提示PEDF-Fc融合蛋白和顺铂联用对于肺癌治疗的潜在价值值得进一步研究。