目的 以PTEN为靶点比较人胶质瘤细胞SWO38及其克隆亚系SWOZ1和SWOZ2在基因水平表达的差异,探讨胶质瘤异质性的分子机制。 方法 (1) 应用RT-PCR法扩增人胶质瘤细胞SWO38及SWOZ1和SWOZ2中的PTEN基因,电泳带灰度测定分析。(2) PCR-SSCP法检测SWO38及SWOZ1和SWOZ2中PTEN基因突变情况。(3) 将SWO38及SWOZ1和SWOZ2中扩增的PTEN基因进行测序和BLAST比对分析,确定有无突变及突变的位置和类型,比较三者间的差异。 结果 (1) PTEN基因在人胶质瘤细胞SWO38及SWOZ1、SWOZ2中均有表达,且表达量各不相同,SWO38表达量最多,SWOZ2次之,SWOZ1表达量最少。(2) PCR-SSCP检测未发现SWO38及SWOZ1、SWOZ2中的PTEN基因有突变。(3)测序结果显示SWO38及SWOZ1、SWOZ2三者的PTEN基因编码序列长度相同,碱基组成及排列顺序亦完全相同;此序列经BLAST比对后发现与数据库中4条序列完全匹配,同一性达100%,其相似性分数值(S)最大:Score=2403 bits(1212),期望值(E)最小:Expect=0.0,这4条序列均为野生型PTEN的mRNA序列,含有完整的1209bp的编码区序列;ORF finder比对结果显示此序列编码的氨基酸序列与野生型PTEN编码的氨基酸序列相同。 结论 (1) 人胶质瘤细胞SWO38及SWOZ1、SWOZ2中,PTEN基因在mRNA水平表达量明显不同,这些差异表达可能对胶质瘤异质性的产生起重要作用,并可能是决定两亚株细胞表现不同生物学行为的机制之一。(2) SWO38及SWOZ1、SWOZ2的PTEN基因编码序列完全一样,是相同遗传背景的表现之一。(3) 在cDNA水平未发现有基因突变,均表现为野生型PTEN基因编码序列。(4) SWOZ1和SWOZ2两株细胞可为进一步研究胶质瘤异质性分子机制提供良好的体外实验模型。