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目的:研制无细胞毒性猪去细胞真皮基质(PADM),进行PADM修复深度烧伤创面的实验研究及临床观察;制备成纤维细胞-胶原-PADM复合基质,构建组织工程全层皮肤并进行烧伤创面修复的实验研究。 方法:1.取0.3-0.4mm厚的猪断层皮片,使用高渗盐水/氢氧化钠法制备PADM,经交联和消毒后进行细菌学及猪病毒学检测。PADM植入SD大鼠皮下,术后动态观察。SD大鼠背部做全层皮肤缺损,实验组Ⅰ(高渗盐水/氢氧化钠法制备的PADM+自体微粒皮、同种异体皮移植)、实验组Ⅱ(Dispase Ⅱ/TritonX-100法制备的PADM+自体微粒皮、同种异体皮移植),手术后2,4、6周动态观察植皮成活情况。在知情同意的前提下,大面积深度烧伤患者切削痂后创面,应用PADM+自体微粒皮+异体皮覆盖创面,手术后观察创面愈合情况。2.酶消化法进行表皮细胞和成纤维细胞培养,绘制表皮细胞原代生长曲线,MTT法测定传代后表皮细胞的增殖。成纤维细胞直接或与胶原混合后种植于PADM表面,构建活性真皮替代物。ELISA法测定培养液中人TGF-β1、bFGF含量。表皮细胞种植在活性真皮基质的胶原面,构建组织工程皮肤。RT-PCR法检测气-液面培养对表皮细胞bFGF、TGF-β1、KGF表达影响。SD大鼠背部全层皮肤缺损,分别进行组织工程皮肤(实验Ⅰ组)和单纯表皮细胞膜片移植(实验Ⅱ组)的实验研究。 结果:1.PADM无细胞成分,细菌学和病毒检测均为阴性。大鼠皮下植入PADM术后24周,仍然可见其结构。2.实验组Ⅰ、Ⅱ愈合质量无差异,上皮细胞分化良好,胶原纤维排列有序,基底膜完整。PADM结合自体微粒皮和异体皮移植,创面愈合质量明显优于自体微粒皮和异体皮移植的临床效果。3.成纤维细胞和表皮细胞体外培养均贴壁生长。原代表皮细胞生长速度为包皮组>头皮组>腋窝组,经过传代后不同部位表皮细胞生长增殖无差别(P>0.05)。4.实验组Ⅰ的TGF-β和bFGF含量至第8天已经达到稳定水平,实验组Ⅱ第4天含量达到稳定水平,实验组Ⅱ的细胞因子含量高于实验组Ⅰ(P<0.05)。5.组织工程皮肤具有上皮层和真皮层,表皮细胞之间有桥粒连接。气