【摘 要】
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目的:合成人参皂苷Rh1(GsRh1)的人工抗原,为获得其单克隆抗体奠定基础。方法:采用高碘酸钠氧化法分别合成GsRh1免疫抗原(GsRh1-BSA)和包被抗原(GsRh1-OVA);用紫外光谱法和薄
【机 构】
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北京中医药大学基础医学院;北京中医药大学科学实验中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81274043,81373542);北京中医药大学“经典方剂的应用基础研究”创新团队资助项目(2011-CXTD-10)
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目的:合成人参皂苷Rh1(GsRh1)的人工抗原,为获得其单克隆抗体奠定基础。方法:采用高碘酸钠氧化法分别合成GsRh1免疫抗原(GsRh1-BSA)和包被抗原(GsRh1-OVA);用紫外光谱法和薄层色谱法鉴定人工抗原的合成是否成功;利用GsRh1-BSA免疫小鼠制备血清多抗;通过优化封闭液和包被原工作浓度,建立酶联免疫吸附分析法(ELISA)的最佳工作条件,并检测血清中抗体效价及特异性。结果:紫外光谱和薄层色谱法鉴定结果表明,GsRh1与BSA/OVA偶联成功,免疫后小鼠血清中产生了能特异性地与GsRh1结合的抗体,效价达到1∶32000,线性范围为10~10000 ng·mL-1,经分析确定ELISA的最佳包被浓度为1∶4000,最佳封闭液为10 mg·mL-1的明胶溶液。结论:成功合成了GsRh1人工抗原,并诱发小鼠产生了抗GsRh1的抗体,可用于下一步单克隆抗体的制备。
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