【摘 要】
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目的 本研究旨在探讨中东呼吸综合征冠状病毒包膜蛋白(MERS-CoV E蛋白)诱导293T细胞自噬其及作用机制. 方法 构建表达载体pEGFP-E、pEGFP-ERT、pEGFP-ORF5-E,分别将其转染293
【机 构】
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南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室,广东广州510515
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目的 本研究旨在探讨中东呼吸综合征冠状病毒包膜蛋白(MERS-CoV E蛋白)诱导293T细胞自噬其及作用机制. 方法 构建表达载体pEGFP-E、pEGFP-ERT、pEGFP-ORF5-E,分别将其转染293T细胞,采用荧光显微镜和Western blot方法检测目的蛋白的表达,采用Western blot方法检测LC3的表达量,采用Real-time PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测自噬相关基因Atg4,Atg5,Atg7,P62,PI3KC3的表达情况. 结果 成功构建pEGFP-E、pEG-FP-ERT、pEGFP-ORF5-E表达载体,在293T细胞中可检测到目的蛋白的表达.转染后24 h,与阴性对照组相比,pEG-FP-E实验组LC3 Ⅱ的表达量显著高于转染pEGFP-N1阴性对照组(P＜0.05),但转染pEGFP-E的实验组自噬相关基因(P62、PI3KC3、Atg4、Atg5、Atg7)的mRNA水平以及相应蛋白的表达量与阴性对照组相比,差异无统计学意义(均P＞0.05),这表明在293T细胞中过表达MERS-CoV E蛋白能增加LC3 Ⅱ的表达,但并不引起自噬相关基因转录和相应蛋白表达水平的变化. 结论 MERS-CoV E蛋白可诱导293T细胞自噬,其机制不依赖于Atg蛋白.
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