目的研究临床分离的耐阿米卡星肺炎克雷伯菌亲缘关系及氨基糖苷类耐药基因的流行情况及标本分布,为临床感染控制提供依据。方法采用WalkAway 96 PLUS全自动细菌鉴定及药敏分析仪,对2013年6月—2014年11月院内临床分离的27株耐阿米卡星肺炎克雷伯菌,进行细菌鉴定和药敏试验,采用纸片扩散法和E-test法检测部分抗菌药物的敏感性。用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测氨基糖苷类耐药基因,并对部分阳性基因进行测序。多位点序列分型法(multilocus sequence typing,MLST)鉴定菌株之间的亲缘关系。结果 27株耐阿米卡星肺炎克雷伯菌中,88.9%(24/27)16S rRNA甲基化酶基因rmtB阳性,51.9%(14/27)aac(3)-Ⅱ、40.7%(11/27)aac(6′)-Ⅰ和40.7%(11/27)ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷类修饰酶基因阳性。MLST分析有9种序列类型,依次为ST37(40.7%)、ST11(40.7%)、ST1(11.1%)、ST789(11.1%)、ST15(7.4%)、ST147(7.4%)、ST76(3.7%)、ST722(3.7%)和ST290(3.7%)。29.6%(8/27)的标本分布在ICU重症监护病房,18.5%(5/27)的标本分布在神经内科病房。51.9%(14/27)标本来源于痰液,37.04%(10/27)标本来源于尿液。结论院内发生过ST11型产16S rRNA甲基化酶基因rmtB阿米卡星肺炎克雷伯菌的克隆流行株。肺炎克雷伯菌对阿米卡星耐药与携带rmtB和aac(6′)-Ⅰ氨基糖苷类耐药基因关系密切。