【摘 要】
：
目的 在原核系统中表达全长HIV-1p24抗原,并对其抗原性进行鉴定.方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(BH-10)中扩增p24抗原基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连
【机 构】
：
广东省疾病预防控制中心,中山生物工程有限公司
论文部分内容阅读
目的 在原核系统中表达全长HIV-1p24抗原,并对其抗原性进行鉴定.方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(BH-10)中扩增p24抗原基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达p24抗原.运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用Western Blot(WB)及ELISA法对表达产物的抗原性进行检测.结果 PCR产物和构建的重组质粒pET22b-p24经双酶切插入的外源基因片段均为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致.纯化蛋白SDS-PAGE电泳,可见1条相对分子量约26×103的外源表达蛋白带,与预期大小一致,未见杂蛋白带.WB结果显示重组蛋白与HIV-1阳性血清呈特异性反应,与健康人血清没有反应.ELISA检测p24抗原灵敏度为93.94%(62/66),特异性为93.33%(28/30).结论 构建了HIV-1 p24表达载体pET22b-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性,为研制HIV抗体确认试剂奠定了良好的基础.
其他文献
用单基质及混合基质体系,探讨了白腐菌Pleurotus ostreatus BP对氮杂环化合物的降解规律.结果表明,在弱酸性环境下,白腐菌能有效降解喹啉和吲哚.单摹质体系中,喹啉的降解率15
气候环境变化作为影响或制约古文化发展、演化的重要因素,虽然经常受到质疑,但依然被越来越多的考古工作者,包括一些古气候学者所接受.关中地区是我国古代文明重要的发源地之
采用微波消解制样技术,用电感耦合等离子体发射光谱(ICP-AES)法测定聚氯乙烯(PVC)塑钢门窗中的Pb、Zn、Ti、Cu等重金属元素含量,确定了实验的最佳测定条件。结果表明:方法的
目的 探讨不同浓度雌激素对人类脂肪组织来源干细胞生长增殖以及定向分化成脂肪细胞的影响.方法 对3例患者行脂肪抽吸术,并进行脂肪组织来源干细胞的分离培养及传代,利用流式
采用EOS-Terra/MODIS数据对内蒙古的沙尘暴进行监测研究.通过分析沙尘暴的波谱特征和MODIS传感器通道的特点,采取基于双通道阈值的叠加分析法对沙尘暴进行提取监测.结果表明
本研究在建立节瘤拟杆菌PCR检测方法的基础上,将PCR方法用于临床样品的检测.PCR检测发现制约PCR直接检测临床样品检出率的主要因素是临床样品中细菌外的抑制物;采自趾叉皮炎
目的:表达与提纯RIZ1第1个至第200个氨基酸含PR结构域的活性GST融合蛋白质(GST-PR200融合蛋白).方法:设计引物以含人RIZ1 cDNA全序列的pRIZ1 RH质粒为模板克隆获得目的基因片
实验动物科学是医学和生物学发展的基础,又是衡量一个国家科学水平的重要标志.随着我国社会主义建设和科学技术事业的发展,从我国实际情况出发,应加速发展卫生系统的实验动物
采用羊脾作为原料,苯酚-稀盐法进行RNA提取,提取率为1.45‰.蛋白质浓度检验试剂盒BCA法测定蛋白含量为2.05%,紫外分光光度计测定吸光度比值(260 nm/280 nm)为1.84,定磷法测DN
目的 探讨淋巴结转移率(rN)在胃癌患者预后评估中的价值.方法 对比分析319例接受胃癌根治术且清扫的淋巴结总数大于或等于15枚胃癌患者的临床资料,探讨rN与胃癌预后的关系.结