【摘 要】
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目的探讨钙蛋白酶(calpain)调控巨噬细胞极化的分子机制。方法以巨噬细胞RAW264.7为模型,通过脂质体Lipofectamine 2000瞬时转染技术干扰巨噬细胞内calpain1和calpain2的表达
【机 构】
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复旦大学附属中山医院皮肤科,上海交通大学医学院附属瑞金医院风湿免疫科
【基金项目】
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国家自然科学基金（81641087）, 上海市卫计委科研基金（201640071）
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目的探讨钙蛋白酶(calpain)调控巨噬细胞极化的分子机制。方法以巨噬细胞RAW264.7为模型,通过脂质体Lipofectamine 2000瞬时转染技术干扰巨噬细胞内calpain1和calpain2的表达。q RT-PCR分析巨噬细胞极化类型:M1型细胞标志物IL-23、TNF-α和i NOS;M2型细胞标志物IL-10、TGF-β和Arg-1。Western blot检测NF-κB/STAT3信号通路的蛋白质水平。Transwell法检测巨噬细胞迁移功能。结果 Calpain1在M1型细胞内表达水平较M2型低(P<0.05),而calpain2在M1型细胞内表达水平与M2型相比明显升高(P<0.05)。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞calpain1-siRNA组M1型细胞标志物和M2型细胞标志物m RNA水平降低;calpain2-siRNA组M1型细胞标志物m RNA水平明显降低(P<0.05),而M2型细胞标志物m RNA水平升高(P<0.05)。在calpain2-siRNA干预组,LPS刺激巨噬细胞的总磷酸化-IKK(phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,p-IKK)蛋白质水平降低;IL-4刺激巨噬细胞的细胞质的信号转导和转录活化蛋白3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)蛋白质水平降低,而细胞的总磷酸化-p65(phosphorylation-p65,p-p65)水平差异无统计学意义。calpain1-siRNA和calpain2-siRNA干预后,巨噬细胞的迁移能力都减弱(P<0.05)。结论 calpain2可能通过NF-κB和STAT3信号通路促使巨噬细胞向M1极化,并通过calpain1-siRNA和calpain2-siRNA干预来调控巨噬细胞的迁移。
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