【摘 要】
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目的:探讨甲基转移酶样蛋白3 (METTL3)在5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制.方法:大剂量间歇诱导法建立5-FU耐药细胞株.在耐药组细胞中分别敲减METTL3及EZH2抑制GSK343处理.qPCR及Western blot检测METTL3和EZH2表达.CCK-8检测各组细胞增殖情况.m6A甲基化RNA免疫沉淀技术分析EZH2 mRNA m6A修饰修饰情况.结果:各药物浓度处理下的耐药组细胞增殖活性与未处理细胞无显著差异(P＞0.05)而原代细胞组肠癌细胞较未处理细胞在0.5-10 μg/mL处理下细胞
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院胃肠外科 上海201203;上海中医药大学附属曙光医院肿瘤科 上海201203
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目的:探讨甲基转移酶样蛋白3 (METTL3)在5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制.方法:大剂量间歇诱导法建立5-FU耐药细胞株.在耐药组细胞中分别敲减METTL3及EZH2抑制GSK343处理.qPCR及Western blot检测METTL3和EZH2表达.CCK-8检测各组细胞增殖情况.m6A甲基化RNA免疫沉淀技术分析EZH2 mRNA m6A修饰修饰情况.结果:各药物浓度处理下的耐药组细胞增殖活性与未处理细胞无显著差异(P＞0.05)而原代细胞组肠癌细胞较未处理细胞在0.5-10 μg/mL处理下细胞增殖活性显著减低(P＜0.01).耐药组细胞与原代细胞组相比,METTL3及EZH2表达水平显著升高(P＜0.01).耐药组细胞METTL3敲减后或GSK343处理后,在0.5μg/mL-10 μg/mL浓度间下的细胞增殖活性与0μg/mL处理细胞增殖活性相比显著减低(P＜0.05).耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2表达与对照细胞比,显著下调(P＜0.01).m6A甲基化RNA免疫沉淀实验显示耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2 mRNA m6A修饰水平(m6A富集度为6361.95+ 67.47％),较未敲减细胞修饰水平(396.30+ 57.74)显著减低(P＜0.01).结论:METTL3在肠癌细胞5-FU耐药抵抗中起到关键作用,靶向抑制METTL3有望成为缓解肠癌耐药的重要分子靶点.
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