一种改进的水稻成熟胚愈伤组织高效基因转化系统

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以成熟胚愈伤组织为材料的农杆菌介导水稻转化法虽已建立,但转化频率仍有待提高。本文以粳稻(Oryzasativa)品种(中花10号和中花11号)的成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,对组织培养体系及影响遗传转化的因素进行优化,建立了一套改进的农杆菌介导的水稻高效遗传转化系统。农杆菌菌株为EHA105,质粒载体是pUN1301/OsRAA1,其中含有标记基因GUS和筛选基因HPT。愈伤组织诱导培养基为NBD2(NB+2mg·L-12,4-D),继代培养基为NBD0.5,预分化与分化培养基为RE1(MS+1mg·L-16-BA+0.25mg·L-1NAA+0.5mg·L-1KT+0.2mg·L-1ZT)和RE2(MS+1mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA+0.5mg·L-1KT+0.2mg·L-1ZT)。另外,还分析了影响T-DNA转移的多种因素,如外植体种类、愈伤组织预培养基和愈伤组织继代次数等。采用优化的转化程序,水稻愈伤组织转化率和植株转化率可达70%以上。
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