【摘 要】
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目的:探讨蛋白激酶Cα(PKCα)在脂多糖(LPS)诱导的C57BL/6J小鼠急性肺损伤中的作用及PKCα对小鼠肺损伤过程中细胞自噬及焦亡的调控.方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、DMSO组、DMSO+calphostin C组、LPS组和LPS+DMSO+calphostin C组,每组9只.按0.15 mg/kg剂量腹腔注射calphostin C预处理小鼠4 h以抑制PKCα的活化.将LPS以10 mg/kg的剂量经口气管插管滴入小鼠气道刺激24 h后收取支气管肺泡灌洗液(BALF)及
【机 构】
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温州医科大学附属第一医院呼吸与危重症医学科,浙江温州325000
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目的:探讨蛋白激酶Cα(PKCα)在脂多糖(LPS)诱导的C57BL/6J小鼠急性肺损伤中的作用及PKCα对小鼠肺损伤过程中细胞自噬及焦亡的调控.方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、DMSO组、DMSO+calphostin C组、LPS组和LPS+DMSO+calphostin C组,每组9只.按0.15 mg/kg剂量腹腔注射calphostin C预处理小鼠4 h以抑制PKCα的活化.将LPS以10 mg/kg的剂量经口气管插管滴入小鼠气道刺激24 h后收取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织标本.BALF检测蛋白浓度及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌水平;肺组织HE染色后进行肺损伤病理学评分;通过Western blot及免疫组化染色检测肺组织自噬相关蛋白及NLRP3炎症小体相关蛋白的表达.体外实验中,用calphostin C(100 nmol/L)预处理RAW264.7细胞2 h后予LPS(1 mg/L)刺激6 h及24 h,分别提取细胞蛋白及RNA,Western blot检测自噬相关蛋白(LC3B和p62)及细胞焦亡相关蛋白(NLRP3、cleaved caspase-1、caspase-1和ASC)表达水平,RT-qPCR检测NLRP3炎症小体相关mRNA水平.结果:在LPS诱导的小鼠急性肺损伤中,PKCα磷酸化水平上调(P<0.05);抑制PKCα后LPS诱导的肺损伤病理学改变及肺内炎症反应显著减轻(P<0.01),细胞自噬及焦亡水平显著下调(P<0.01).在RAW264.7细胞中,抑制PKCα也可部分逆转LPS诱导的细胞自噬及焦亡活性(P<0.05).结论:抑制PKCα对LPS诱导的急性肺损伤C57BL/6J小鼠发挥保护作用,其保护机制涉及PKCα-自噬/焦亡信号通路.
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目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)在介导慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的作用及机制,为临床治疗CRSwNP组织重塑寻找新靶点.方法:收集以CRSwNP为诊断的患者15名,鼻中隔偏曲患者15名.采用ELISA、RT-qPCR和免疫组织化学染色方法检测患者相关组织中IL-17A和MMP-9的表达水平;HE染色法观察患者钩突及鼻息肉组织黏膜的病变;Western blot检测鼻息肉原代细胞和人鼻黏膜上皮细胞(HNEpCs)中MMP-9和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK
目的:探讨重楼皂苷I(PPI)对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌的保护作用及其可能机制.方法:将75只BALB/c小鼠随机分成正常对照组(control组)、VMC模型组(VMC组)、阳性药物利巴韦林(RBV,0.02 g·kg?1·d?1)组、低剂量(75 mg·kg?1·d?1)PPI(L-PPI)组和高剂量(300 mg·kg?1·d?1)PPI(H-PPI)组,每组15只.通过腹腔注射CVB3建立VMC小鼠模型,造模2 h后腹腔注射给药,每天1次,连续1周.HE染色观
在不同环境下,细胞需要协调多种信号通路而有组织地适应不断变化的内外环境,以维持细胞稳态.鉴于疾病的复杂性,需要我们向整体研究的思路转变,以重要信号通路为立足点,深入了解疾病背景下信号通路在维系细胞稳态中的调控机制,为药物靶向治疗提供更多的理论基础.
目的:探究长期高葡糖糖水平对胰腺β细胞囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)表达水平的影响,及其是否介导2型糖尿病发病初期胰岛素水平异常.方法:(1)体外实验分别将大鼠胰腺β细胞系RINm5F和原代分离的C57BL/6小鼠胰岛暴露于含有0、10、20和30 mmol/L葡萄糖的RPMI-1640培养液中处理24 h或48 h,通过RT-qPCR和Western blot技术检测不同浓度的葡萄糖对CFTR mRNA和蛋白表达水平的影响,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同浓度的葡萄糖处理24 h后胰岛
1 骨细胞概述rn骨细胞是骨骼系统中含量最丰富、分布最广泛的细胞,由成骨细胞分化而来,包埋于矿化的骨基质中,占成年人骨骼细胞的90％～95％,寿命可长达25年[1].多年来研究者对骨细胞的生物学性质与功能知之甚少.随着骨细胞分离和体外培养技术的开发,人们对骨细胞的认知有了极大的拓展.从最早认为骨细胞是埋藏在矿化骨基质中静止的、不活跃的细胞[2],到发现其机械应力转导和矿物质稳态维持功能[3],再到近几年研究发现骨细胞的骨代谢调控作用[4],骨细胞目前已成为骨生理和骨病理研究的热点.
纤维化通常被认为是组织损伤修复过程中促进伤口愈合的产物.机体受到病理刺激损伤后,组织将开始自我修复,及时高效地替换死亡或受损的细胞,这一修复机制是机体最基本、最重要的生物学过程之一.修复过程通常分为再生阶段和纤维增生阶段.首先当细胞受损后,同类型的细胞进行替换,防止损伤持续;其次正常的实质组织可被结缔组织所取代.
目的:筛选前期研究中EB病毒(EBV)阳性的15例不同类型淋巴瘤病例,对这15例EBV阳性病例进行PCR扩增及EBV核抗原1(EBNA1)羧基端测序分析,观察是否存在突变热点AA487及AA466-527之间的变异.方法:采用PCR方法对EBV阳性病例进行EBNA1基因羧基端的扩增,并将扩增产物送公司进行测序分析.同时分析淋巴瘤患者EBV表达与预后的相关性.结果:本次实验成功扩增15例病例,进行EBNA1基因羧基端测序分析发现,15例标本中EBNA1羧基端均出现序列变异,其中以往报道过的突变有:错义突变A
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)常表现为进行性认知功能障碍与行为损害,也是痴呆最常见的病因,目前全世界约有5000万患者.AD的病理特征是β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)沉积形成细胞外老年斑(senile plaques,SPs)和高磷酸化tau蛋白形成细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillarytangles,NFTs).此外,AD患者神经元进行性死亡,伴有氧化应激和铁超载.
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