莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶的原核表达纯化及其生物学活性

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：eykical520

【摘要】

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利用基因重组技术及简易的纯化方法快速制备莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV-RT）。设计带有酶切位点的引物,PCR获得MMLV-rt基因片段;再通过定点突变将目的基因的五个可溶性位

【作者】

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王贤松马雪梅孙一

【机构】

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北京工业大学生命科学与生物工程学院

【出处】

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生物工程学报

【发表日期】

：

2008年5期

【关键词】

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逆转录酶定点突变酶活力

【基金项目】

：

北京市科技新星计划(B类)(No.2004B05);北京市科委重大项目(No.D0906003000091)资助~~

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利用基因重组技术及简易的纯化方法快速制备莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV-RT）。设计带有酶切位点的引物,PCR获得MMLV-rt基因片段;再通过定点突变将目的基因的五个可溶性位点进行突变,测序正确后,插入到表达载体pET15b中构建成重组表达质粒pET15b-MMLV-rt;表达产物的纯品通过金属离子（Ni3＋）配体亲和纯化系统得到。用SDS-PAGE分析所纯化产物的大小和纯度,再用RT-PCR对其活性进行鉴定。构建的重组表达质粒pET15b-MMLV-rt经IPTG诱导得到N端带有6His的RT融

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