论文部分内容阅读
目的构建人软骨蛋白聚糖(aggrecan)探针,应用于整复外科研究中Northern法对aggrecan mRNA表达水平的检测.方法取人软骨细胞,逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增aggrecan球间区域(IGD)片段.将纯化的RT-PCR产物构建入pUCm-T载体,酶切及测序鉴定.32P标记aggrecan探针,Northern杂交法检测人软骨组织和培养软骨细胞(各3组)以及人正常和瘢痕疙瘩成纤维细胞(各6组)中aggrecan mRNA的表达.结果构建产物经鉴定,显示其包含了人aggrecan IGD的基因序列,与GeneBank已收录序列(M55172)100%相同.Northern结果显示,该探针可用于aggrecan mRNA表达水平的定性和定量检测.对正常人软骨组织和体外培养人软骨细胞的aggrecan/β-actin的吸光度比值进行比较,发现其间(0.575?6±0.015?2/1.369?0±0.020?6)差异具有显著性(P<0.01).结论 Northern杂交法可以对整复外科研究中常见的软骨和瘢痕疙瘩成纤维细胞中aggrecan mRNA的表达水平进行检测,且具有较好的灵敏度和特异性.