【摘 要】
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目的探讨利用壳聚糖-明胶支架和旋转培养系统(RCCS)构建三维培养体系(3D)培养脐血干细胞向血小板分化效果。方法支架构建:冷冻干燥法制备壳聚糖-明胶支架,扫描电镜观察支架表
【机 构】
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第三军医大学第一附属医院输血科中国人民解放军重庆血站;
【基金项目】
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国家自然科学基金(NSFC 81270649);重庆市科委科技攻关项目(CSTC2011AC5039)
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目的探讨利用壳聚糖-明胶支架和旋转培养系统(RCCS)构建三维培养体系(3D)培养脐血干细胞向血小板分化效果。方法支架构建:冷冻干燥法制备壳聚糖-明胶支架,扫描电镜观察支架表面特征;细胞培养:免疫磁珠分选脐血CD34+细胞并在自制支架结合RCCS的培养系统中培养,观察细胞的生长状况,对分化所得血小板作形态及功能鉴定,并与二维培养体系(2D)的培养结果比较。结果成功构建壳聚糖-明胶支架:浓度为0.5%,预冻温度为-30℃,孔径为(86±21)μm、吸水率为(87.62±10.19)%、孔隙率为(92.56±1.12)%,生物相容性好,无毒副作用;该系统诱导培养CD34+d5增殖(87.02±4.35)倍,而2D培养增值(20.78±5.03)倍(P<0.05);培养至21 d收集的类血小板颗粒在镜下观察具有正常的血小板形态特征,黏附功能良好,黏附率为(43.05±1.93)%,2D为(41.37±1.06)%(P>0.05);经凝血酶诱导后可发生聚集;细胞膜CD62p表达的阳性率为(73.82±1.01)%,2D为(75.26±2.57)%(P>0.05)。结论壳聚糖-明胶支架和RCCS系统构建的3D培养有利于脐血干细胞的体外增殖和向血小板的诱导分化。
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