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目的
观察肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)过程中,整合素连接激酶(ILK)的变化对基质金属蛋白酶-9/金属蛋白酶组织抑制剂-1(MMP-9/TIMP-1)比值的影响。
方法培养人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2),并随机分为正常组、转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(以TGF-β1诱导HK-2细胞间充质转化)、TGF-β1+ILK-siRNA组[使用小干扰RNA (siRNA)技术抑制ILK基因表达]、TGF-β1+无序siRNA组(使用无序小干扰RNA转染)。后两组采用脂质体转染技术,将小干扰RNA转染入HK-2细胞,而后用10 ng/ml TGF-β1刺激细胞,分别提取不同组别细胞的mRNA和蛋白质,采用Real-time RT-PCR和Western blot检测细胞ILK、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、MMP-9、TIMP-1的mRNA和蛋白质的表达,计算MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白质表达的相对比值,比较其统计学差异。
结果TGF-β1刺激的HK-2细胞E-cadherin表达减少,α-SMA表达增加,ILK表达显著增加,MMP-9/TIMP-1比值升高;转染ILK-siRNA可大幅度抑制HK-2细胞ILK基因的表达;且其E-cadherin表达增加,α-SMA表达减少,同时可减小MMP-9/TIMP-1比值升高的程度。
结论ILK可通过影响MMP-9/TIMP-1比值,促进EMT进程。