【摘 要】
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目的 探讨大疱性类天疱疮(BP)和妊娠疱疹(HG)患者血清抗BP180 NC16A抗体的纯化和鉴定方法.方法 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达GST/NC16A融合蛋白,将融合蛋白与谷胱甘肽
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院皮肤科,美国北卡罗来纳大学教堂山分校皮肤科
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目的 探讨大疱性类天疱疮(BP)和妊娠疱疹(HG)患者血清抗BP180 NC16A抗体的纯化和鉴定方法.方法 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达GST/NC16A融合蛋白,将融合蛋白与谷胱甘肽琼脂糖凝聚微珠进行共价偶联.微珠亲和层析法纯化BP和HG患者血清中抗BP180 NC16A抗体,并用ELISA、免疫荧光、及Western印迹进行鉴定.结果 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达37 000GST/NC16A融合蛋白,微珠亲和层析法纯化后得单一抗BP180 NC16A抗体.经ELISA方法定量后确定其含量为2.4 mg/ml；该抗体能与人皮肤基底膜带结合,证明抗体活性；免疫印迹可见单一片段,显示抗体纯度.结论 微珠亲和层析法纯化的BP和HG患者血清中抗BP180 NC16A自身抗体活性高、特异性强.
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