论文部分内容阅读
目的
探讨凋亡及其相关基因在自身免疫性内耳病形成和发展中的作用.
方法选用近交系C57BL/6小鼠随机数字表法分为正常对照组和免疫7、14、21、28 d组,每组16只.提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原,与等量完全弗氏佐剂,百日咳杆菌一次免疫实验组动物,制备自身免疫性内耳病动物模型,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d-UTP nick end-labing,TUNEL)检测内耳中的细胞凋亡,应用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Fas、FasL及bcl-2在内耳的表达.
结果正常小鼠内耳组织中,TUNEL染色阳性细胞极为少见,偶尔在Corti器或球囊斑的支持细胞发现.免疫7 d后,内毛细胞和少量的血管纹边缘细胞TUNEL染色阳性,14 d后TUNEL 染色阳性的细胞数量及种类显著增加,但外毛细胞、螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞免疫前后均未见凋亡表达.免疫组化染色显示,正常小鼠内耳中Fas表达广泛,FasL在部分螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞表达,bcl-2仅在螺旋神经节细胞、前庭神经节细胞有较强表达.免疫后FasL在各种组织均有较强表达,bcl-2在外毛细胞出现表达,在耳蜗神经元细胞的表达增加.RT-PCR检测正常小鼠内耳组织的Fas mRNA、FasL mRNA、bcl-2 mRNA均为阳性,FasL mRNA低水平表达,免疫后升高,在2周达到高峰后逐渐下降;bcl-2 mRNA在免疫后进行性升高.
结论Fas/FasL信号系统介导的凋亡与自身免疫性内耳病的发生、发展过程关系密切,bcl-2对内耳中Fas/FasL介导的凋亡有重要的调节作用.