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本报告用薄层层析(TLC)定性、定量强化食品中赖氨酸。
原理:样品经处理后,点板、展开、喷以茚三酮显色,根据TLC法的比移植(Rf)与标准比较定性;将色斑刮下,洗脱液在510nm波长测定吸光度,与标准比较定量。
样品处理:称取10g~20g样品,加蒸馏水溶解,定容至25ml,混匀,放置数分钟,过滤,滤液备用。
薄层分离:制板称取4.5g硅胶G制成15cm×5cm板4块,100℃活化后置干燥器中备用
点样:用微量注射器在以活化的硅胶G板上分别点赖氨酸标准溶液(2mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0(μl)及样品提取液5μl,于8.0℃以下干燥。
展开:以正丁醇:醋酸(1:1)为展开剂展开(约4h时展至板顶端),挥去溶剂,再放入烘箱内至干。
显色定性取出薄板,喷以0.5%茚三酮溶液,80℃烘箱中放置10min,根据显示红色斑点的Rf值与标准比较定性。
定量:小心将红色斑点刮下(同时刮下相当的硅胶G作为空白),放入10ml比色管中,分别加入5ml洗脱液(75%乙醇:0.2%硫酸铜39:1)摇匀数分钟,静置20min,离心10min(2000rpm),取上清液于510nm,1cm比色杯吸光度,并绘制标准曲线,求出样品中赖氨酸的含量。
计算:
赖氨酸(mg/100g)=[A×1000w×V2V1×100]
式中A——样品溶液中相当赖氨酸量,μg;V2——点样量,μl;V1——样品定容积,ml;W——取样重量,g。
结果:本法线性浓度范围2μg~10μg;最低检出量0.2μg;添加回收率82%~119%。
原理:样品经处理后,点板、展开、喷以茚三酮显色,根据TLC法的比移植(Rf)与标准比较定性;将色斑刮下,洗脱液在510nm波长测定吸光度,与标准比较定量。
样品处理:称取10g~20g样品,加蒸馏水溶解,定容至25ml,混匀,放置数分钟,过滤,滤液备用。
薄层分离:制板称取4.5g硅胶G制成15cm×5cm板4块,100℃活化后置干燥器中备用
点样:用微量注射器在以活化的硅胶G板上分别点赖氨酸标准溶液(2mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0(μl)及样品提取液5μl,于8.0℃以下干燥。
展开:以正丁醇:醋酸(1:1)为展开剂展开(约4h时展至板顶端),挥去溶剂,再放入烘箱内至干。
显色定性取出薄板,喷以0.5%茚三酮溶液,80℃烘箱中放置10min,根据显示红色斑点的Rf值与标准比较定性。
定量:小心将红色斑点刮下(同时刮下相当的硅胶G作为空白),放入10ml比色管中,分别加入5ml洗脱液(75%乙醇:0.2%硫酸铜39:1)摇匀数分钟,静置20min,离心10min(2000rpm),取上清液于510nm,1cm比色杯吸光度,并绘制标准曲线,求出样品中赖氨酸的含量。
计算:
赖氨酸(mg/100g)=[A×1000w×V2V1×100]
式中A——样品溶液中相当赖氨酸量,μg;V2——点样量,μl;V1——样品定容积,ml;W——取样重量,g。
结果:本法线性浓度范围2μg~10μg;最低检出量0.2μg;添加回收率82%~119%。