【摘 要】
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目的构建SDF-1、HOXB4和SDF-1/HOXB4融合基因腺病毒表达载体,转染体外培养的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),比较其对CD34+细胞体外扩增及干性维持的影响。方法
【机 构】
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第三军医大学西南医院血液科,第三军医大学军事预防医学院毒理学研究所,
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目的构建SDF-1、HOXB4和SDF-1/HOXB4融合基因腺病毒表达载体,转染体外培养的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),比较其对CD34+细胞体外扩增及干性维持的影响。方法全基因合成SDF-1/HOXB4基因序列,以其为模板,经PCR、酶切及测序鉴定,构建表达SDF-1、HOXB4和SDF-1/HOXB4的3种腺病毒载体,转染至293A细胞进行包装和病毒滴度测定,并转染体外培养的MSCs,分别为SDF-1组、HOXB4组和S-H组,转染空腺病毒载体的为阴性对照,转录水平及蛋白水平检测MSCs中外源基因表达。4组MSCs和CD34+细胞共培养7 d,计数细胞并检测其CD34+表达。结果测序表明3种腺病毒载体构建成功,在293A细胞中成功包装并获取病毒,RT-PCR和Western blot检测3个基因在MSCs细胞中稳定高表达,MSCs和CD34+细胞共培养,扩增细胞数目SDF-1组(9.52±2.24)、S-H组(8.11±2.34)显著高于对照组(4.85±2.53,P<0.05),S-H组(CD34+表达为1.85%)较SDF-1组(1.20%)、HOXB4组(1.28%)更利于CD34+细胞干性维持。结论表达SDF-1/HOXB4融合基因的MSCs对CD34+细胞体外扩增及干性维持作用更好。
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