【摘 要】
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目的 探讨苗药验方四大血(SX)对人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡和焦亡的影响.方法 数据库检索RA及凋亡、焦亡相关靶蛋白;韦恩软件分析获得与RA相关凋亡及焦亡蛋白;RA-凋亡-焦亡靶蛋白互作(PPI)网络构建以获取RA中凋亡和焦亡重要靶蛋白;Autodock vina软件进行分子对接验证SX主要活性成分与凋亡和焦亡相关蛋白的结合能力,并通过PyMoL软件进行可视化.人源第2代RA-FLSs MH7A细胞检测SX对MH7A细胞抑制率后分为空白对照组、雷公藤多甘片阳性对照组(TGT组
【机 构】
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贵州医科大学基础医学院,贵州 贵阳 550025;贵州医科大学临床医学院,贵州 贵阳 550025;贵州医科大学医学分子生物学重点实验室,贵州 贵阳 550004
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目的 探讨苗药验方四大血(SX)对人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡和焦亡的影响.方法 数据库检索RA及凋亡、焦亡相关靶蛋白;韦恩软件分析获得与RA相关凋亡及焦亡蛋白;RA-凋亡-焦亡靶蛋白互作(PPI)网络构建以获取RA中凋亡和焦亡重要靶蛋白;Autodock vina软件进行分子对接验证SX主要活性成分与凋亡和焦亡相关蛋白的结合能力,并通过PyMoL软件进行可视化.人源第2代RA-FLSs MH7A细胞检测SX对MH7A细胞抑制率后分为空白对照组、雷公藤多甘片阳性对照组(TGT组,5 mg/L)及5、10、20、40 mg/L SX组,采用Wound-healing实验、Transwell法、ELISA法及Western blot法分别检测MH7A细胞的迁移和侵袭能力、凋亡和焦亡相关蛋白.结果 获得RA相关凋亡靶蛋白9个、焦亡靶蛋白15个、RA-凋亡-焦亡重叠靶蛋白4个,SX主要活性成分与TNF-α、Fas、Bax等靶蛋白均具有较高亲和力;与空白组相比,给药处理24、48、72 h,随着SX浓度增加,对MH7A细胞抑制率增加(P<0.05),药物作用6、12、24 h,同一时间点内MH7A细胞划痕修复率随SX浓度增加而减少(P<0.05);药物作用24 h,20、40 mg/L SX组MH7A细胞侵袭个数减少(P<0.05);20、40 mg/L SX组和TGT组TNF-α、IL-1β、IL-18的表达水平均下降(P<0.05);20、40 mg/L SX组Bax/Bcl-2比值均增加(P<0.05);5、40 mg/L SX组Caspase-1表达量均减少(P<0.05);20、40 mg/L SX组Fas和FasL表达量均增加(P<0.05).结论 SX可诱导MH7A细胞凋亡、抑制其焦亡,减缓炎症反应,其作用机制可能与下调TNF-α、IL-1β、IL-18细胞因子水平,上调Bax、Fas、FasL,抑制Bcl-2和Caspase-1蛋白表达有关.
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