论文部分内容阅读
摘要 2016年2月24日，安徽省某动物园川金丝猴出现贫血、腹泻继而死亡的病例。根据临床症状、病理剖检疑似为细菌感染。通过细菌分离、基因序列比对、药敏试验和寄生虫检查，结果表明，该病例为金黄色葡萄球菌和毛首鞭形线虫混合感染。
关键词 川金丝猴；金黄色葡萄球菌；毛首鞭形线虫；诊治
中图分类号 S858.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）15-0235-01
川金丝猴为我国特产的珍稀物种，广泛分布于四川、陕西、贵州、云南、西藏等地森林中。多年来国内外专家学者十分重视和关注川金丝猴的研究，在疾病病因等方面进行了大量的报道。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，可产生多种毒素，肠毒素类金黄色葡萄球菌可引起猴胃肠炎、食物中毒、腹泻等症状[1]。川金丝猴对毛首鞭形线虫（以下简称鞭虫）极其敏感，重度感染可导致患猴精神不振、体温升高、稀便腹泻、消瘦贫血最后衰竭而死[2]。临床上常见金黄色葡萄球菌或毛首鞭形线虫单一感染[3-4]，对于混合感染的病例极其少见。本文就安徽省某动物园一例川金丝猴金黄色葡萄球菌与毛首鞭形线虫混合感染的病例进行研究报道，以期为此类病症的诊治提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 病例来源。安徽省某动物园。
1.1.2 主要试剂与仪器。琼脂糖购自青岛海博生物科技有限公司；革兰氏染液购自北京索莱宝科技有限公司；氨苄西林、头孢呋辛、青霉素等药敏纸片，均购自杭州微生物试剂有限公司。辅酶购自上海生工生物工程股份有限公司。
1.2 研究方法
1.2.1 病死川金丝猴剖检及病原菌的分离。将死亡川金丝猴进行剖解观察，采集病料。无菌条件下剪取肝脏、肺脏，用接种环取心包液接种于辅酶培养基上，划线分离；于37 ℃培养24 h后，挑取连续单个菌落于辅酶培养基中进行纯化。将纯化后的菌落进行革兰氏染色后，接种于TSB培养基中，继续在摇床37 ℃培养24 h。
1.2.2 细菌药敏试验。将病料中分离纯化的细菌进行药敏试验，用常规药敏纸片法[5]进行。所用药敏试验的试纸种类如下：青霉素类（青霉素、氨苄西林）；头孢菌素类（头孢他啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢哌酮、头孢呋辛、头孢唑林钠、头孢拉定）；磺胺类（复方新诺明）；酰胺醇类（氯霉素）。试验结果判定标准参照美国临床检验标准委员会（CLSD）指定标准。
1.2.3 细菌16S rDNA 检测。挑取连续单个菌落到TSB培养基中，于37 ℃摇菌过夜，按常规方法提取细菌DNA模板。经16S rDNA通用引物进行特异性PCR扩增后，进行琼脂糖凝胶电泳检测。将PCR产物送至上海桑尼生物公司测序，测序结果到NCBI网站进行比对。
1.2.4 寄生虫检查。取川金丝猴胃部内容物及肠内容物进行寄生虫检查。
2 结果与分析
2.1 剖检病变观察
腹腔内有腹水，肝脏边缘肿大，半侧肺脏淤血，见图1。心脏外观正常，心肌疲软，见图2。呼吸道正常。胃内容物中发现灰白色线状寄生虫。其他组织脏器无明显肉眼可见病变。
2.2 病原菌分离与检测试验结果
2.2.1 细菌分离与培养。细菌再辅酶培养基上均为湿润、光滑、隆起、边缘整齐的圆形菌落；在TSB培养基37 ℃摇床培养24 h呈均匀浑浊样。
2.2.2 革兰氏染色镜检。显微镜下观察可见大量蓝紫色球菌，多呈双球状排列。
2.2.3 细菌药敏试验。药敏试验结果表明，该菌对氨苄西林、头孢呋辛、头孢唑啉极敏感、对头孢氨苄、青霉素、头孢哌酮、头孢拉定、头孢曲松中度敏感，对头孢他啶、氯霉素低度敏感。
2.2.4 序列比对。根据序列比对结果可确定该株细菌为金黄色葡萄球菌。
2.3 寄生虫检查结果
显微镜观察在胃内容物中发现毛首鞭形线虫成虫，肠内
容物中发现毛首鞭形线虫卵囊，如图3、4所示。
3 结论
经过临床检查和试验诊断，确诊该病例死亡原因为金黄色葡萄球菌和毛首鞭形线虫混合感染。野生灵长类动物的寄生虫相关研究表明，圈养川金丝猴感染毛首鞭形线虫的概率极高，且存在重复感染的现象，近年来时有报道。可定期对其粪便进行显微镜镜检，加强粪便中寄生虫检查力度，定期做好药物驱虫。尤其值得注意的是根据川金丝猴的繁殖周期选择药物，防止因药物原因导致怀孕母猴流产。在川金丝猴肝脏、肺脏中均有革兰氏阳性金黄色葡萄球菌，根据药敏试验结果选择敏感类药物，按剂量及时给药。可适当延长用药时间，巩固疗效并减少耐药性产生。
根据川金丝猴生理特性和习性，按季节性选择多种食物，每天按时投喂食物，保证粗纤维类饲料比例，减少精饲料的投喂，以增强动物抵抗力，可以有效避免疾病发生[6]。
定期對笼舍进行消毒，避免滋生细菌。对舍内其他动物应加强疾病防治，防止此类情况再次发生。
4 参考文献
[1] 张向鹏.贵州地区3种园养野生动物常见疾病的调查及防治对策[D].南京：南京农业大学，2003.
[2] 寿晓玲，王才益，杜爱芳.杭州动物园川金丝猴消化道疾病的防控研究[J]. 浙江畜牧兽医，2014（3）：41-42.
[3] 汪乾坤.神农架川金丝猴常见病流行病学初步研究[D].武汉：华中农业大学，2015.
[4] 邓家波，牛李丽，王强.川金丝猴金黄色葡萄球菌感染的诊治一例[J].四川动物，2008（3）：436.
[5] 李波.中国部分动物园灵长类动物胃肠道寄生虫与大肠杆菌的调查研究[D].成都：四川农业大学，2010.
[6] 李明杰.川金丝猴的饲养管理与疾病防治综述[J].野生动物，2012，33（6）：350-353.
关键词 川金丝猴；金黄色葡萄球菌；毛首鞭形线虫；诊治
中图分类号 S858.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）15-0235-01
川金丝猴为我国特产的珍稀物种，广泛分布于四川、陕西、贵州、云南、西藏等地森林中。多年来国内外专家学者十分重视和关注川金丝猴的研究，在疾病病因等方面进行了大量的报道。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，可产生多种毒素，肠毒素类金黄色葡萄球菌可引起猴胃肠炎、食物中毒、腹泻等症状[1]。川金丝猴对毛首鞭形线虫（以下简称鞭虫）极其敏感，重度感染可导致患猴精神不振、体温升高、稀便腹泻、消瘦贫血最后衰竭而死[2]。临床上常见金黄色葡萄球菌或毛首鞭形线虫单一感染[3-4]，对于混合感染的病例极其少见。本文就安徽省某动物园一例川金丝猴金黄色葡萄球菌与毛首鞭形线虫混合感染的病例进行研究报道，以期为此类病症的诊治提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 病例来源。安徽省某动物园。
1.1.2 主要试剂与仪器。琼脂糖购自青岛海博生物科技有限公司；革兰氏染液购自北京索莱宝科技有限公司；氨苄西林、头孢呋辛、青霉素等药敏纸片，均购自杭州微生物试剂有限公司。辅酶购自上海生工生物工程股份有限公司。
1.2 研究方法
1.2.1 病死川金丝猴剖检及病原菌的分离。将死亡川金丝猴进行剖解观察，采集病料。无菌条件下剪取肝脏、肺脏，用接种环取心包液接种于辅酶培养基上，划线分离；于37 ℃培养24 h后，挑取连续单个菌落于辅酶培养基中进行纯化。将纯化后的菌落进行革兰氏染色后，接种于TSB培养基中，继续在摇床37 ℃培养24 h。
1.2.2 细菌药敏试验。将病料中分离纯化的细菌进行药敏试验，用常规药敏纸片法[5]进行。所用药敏试验的试纸种类如下：青霉素类（青霉素、氨苄西林）；头孢菌素类（头孢他啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢哌酮、头孢呋辛、头孢唑林钠、头孢拉定）；磺胺类（复方新诺明）；酰胺醇类（氯霉素）。试验结果判定标准参照美国临床检验标准委员会（CLSD）指定标准。
1.2.3 细菌16S rDNA 检测。挑取连续单个菌落到TSB培养基中，于37 ℃摇菌过夜，按常规方法提取细菌DNA模板。经16S rDNA通用引物进行特异性PCR扩增后，进行琼脂糖凝胶电泳检测。将PCR产物送至上海桑尼生物公司测序，测序结果到NCBI网站进行比对。
1.2.4 寄生虫检查。取川金丝猴胃部内容物及肠内容物进行寄生虫检查。
2 结果与分析
2.1 剖检病变观察
腹腔内有腹水，肝脏边缘肿大，半侧肺脏淤血，见图1。心脏外观正常，心肌疲软，见图2。呼吸道正常。胃内容物中发现灰白色线状寄生虫。其他组织脏器无明显肉眼可见病变。
2.2 病原菌分离与检测试验结果
2.2.1 细菌分离与培养。细菌再辅酶培养基上均为湿润、光滑、隆起、边缘整齐的圆形菌落；在TSB培养基37 ℃摇床培养24 h呈均匀浑浊样。
2.2.2 革兰氏染色镜检。显微镜下观察可见大量蓝紫色球菌，多呈双球状排列。
2.2.3 细菌药敏试验。药敏试验结果表明，该菌对氨苄西林、头孢呋辛、头孢唑啉极敏感、对头孢氨苄、青霉素、头孢哌酮、头孢拉定、头孢曲松中度敏感，对头孢他啶、氯霉素低度敏感。
2.2.4 序列比对。根据序列比对结果可确定该株细菌为金黄色葡萄球菌。
2.3 寄生虫检查结果
显微镜观察在胃内容物中发现毛首鞭形线虫成虫，肠内
容物中发现毛首鞭形线虫卵囊，如图3、4所示。
3 结论
经过临床检查和试验诊断，确诊该病例死亡原因为金黄色葡萄球菌和毛首鞭形线虫混合感染。野生灵长类动物的寄生虫相关研究表明，圈养川金丝猴感染毛首鞭形线虫的概率极高，且存在重复感染的现象，近年来时有报道。可定期对其粪便进行显微镜镜检，加强粪便中寄生虫检查力度，定期做好药物驱虫。尤其值得注意的是根据川金丝猴的繁殖周期选择药物，防止因药物原因导致怀孕母猴流产。在川金丝猴肝脏、肺脏中均有革兰氏阳性金黄色葡萄球菌，根据药敏试验结果选择敏感类药物，按剂量及时给药。可适当延长用药时间，巩固疗效并减少耐药性产生。
根据川金丝猴生理特性和习性，按季节性选择多种食物，每天按时投喂食物，保证粗纤维类饲料比例，减少精饲料的投喂，以增强动物抵抗力，可以有效避免疾病发生[6]。
定期對笼舍进行消毒，避免滋生细菌。对舍内其他动物应加强疾病防治，防止此类情况再次发生。
4 参考文献
[1] 张向鹏.贵州地区3种园养野生动物常见疾病的调查及防治对策[D].南京：南京农业大学，2003.
[2] 寿晓玲，王才益，杜爱芳.杭州动物园川金丝猴消化道疾病的防控研究[J]. 浙江畜牧兽医，2014（3）：41-42.
[3] 汪乾坤.神农架川金丝猴常见病流行病学初步研究[D].武汉：华中农业大学，2015.
[4] 邓家波，牛李丽，王强.川金丝猴金黄色葡萄球菌感染的诊治一例[J].四川动物，2008（3）：436.
[5] 李波.中国部分动物园灵长类动物胃肠道寄生虫与大肠杆菌的调查研究[D].成都：四川农业大学，2010.
[6] 李明杰.川金丝猴的饲养管理与疾病防治综述[J].野生动物，2012，33（6）：350-353.