【摘 要】
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为提高巨大芽孢杆菌谷氨酸脱羧酶活性,通过定向进化技术对其进行酶工程改造。经过二轮易错聚合酶链式反应,从13 000多个突变株中筛选到突变株A5-3、E2-4、E3-11,相对于野生型
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为提高巨大芽孢杆菌谷氨酸脱羧酶活性,通过定向进化技术对其进行酶工程改造。经过二轮易错聚合酶链式反应,从13 000多个突变株中筛选到突变株A5-3、E2-4、E3-11,相对于野生型,其酶比活力提高了157%、115%、97%,且Kcat/Km都有所增大。其中A5-3氨基酸序列发生了2个突变(A55D和D451E)。三维模拟结果表明,第55位丙氨酸突变为天冬氨酸很可能为酶促反应提供H+,从而加快酶促反应效率;突变株E2-4第34位由亮氨酸突变成谷氨酰胺,一定程度上改善了酶的热稳定性;突变株E3-11的第3
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