目的建立一种高纯度的肺泡巨噬细胞分离培养方法,为研究巨噬细胞生物学特性,开展细胞内寄生菌存活机理研究提供材料。方法在无菌环境下以PBS多次灌洗山羊肺脏,收集细胞后,用外周血单核细胞分离液结合密度梯度离心法从混合细胞中分离出羊肺泡巨噬细胞;培养于含10%胎牛血清的细胞培养基中,倒置显微镜下观察细胞形态,并利用其对鸡红细胞的吞噬功能检测细胞活性;采用流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CD14。结果获得的贴壁细胞具典型的巨噬细胞形态学特征,有伪足和突起伸出,呈现圆形及不规则形状,胞浆丰富,胞体较大;培养的巨噬细胞54.5%吞噬了鸡红细胞,具有较强的吞噬活性;在体外连续培养近一个月,仍有93.7%的细胞能特异性表达CD14抗原,具有巨噬细胞特异性免疫表型。结论本研究获得的山羊肺泡巨噬细胞纯度高、生物活性好,为开展细胞内寄生菌的疾病机理研究提供了细胞模型。