【摘 要】
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目的 在细胞分子水平上研究RhoA/Rock信号通路在肺支气管上皮细胞发生上皮-间质转化(EMT)向肌成纤维细胞(MFB)转化发挥的作用.方法 使用人外周血单核细胞系(THP-1)构建矽肺纤
【机 构】
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湖南省职业病防治院职业病二科,湖南长沙410007;中南大学湘雅公共卫生学院,湖南长沙410005
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目的 在细胞分子水平上研究RhoA/Rock信号通路在肺支气管上皮细胞发生上皮-间质转化(EMT)向肌成纤维细胞(MFB)转化发挥的作用.方法 使用人外周血单核细胞系(THP-1)构建矽肺纤维化体外模型中人巨噬细胞,再使用100 mg/mL二氧化硅(SiO2)悬液染尘巨噬细胞12 h后,收集上清液.实验设置分为4组:对照组:人肺支气管上皮细胞(HBE)加入上清液;染尘组:HBE加入上清液后,再加入SiO2悬液染尘,染尘剂量分别为50、100、200 mg/mL;RhoA沉默组:利用小干扰RNA(siRNA)在RNA干扰技术下沉默HBE内RhoA,加入上清液;RhoA沉默染尘组:采用RNA干扰技术沉默HBE内RhoA,加入上清液后,再加入SiO2悬液染尘,染尘剂量分别为50、100、200 mg/mL.4组均培养24 h后,使用Western Blot法测定细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮性钙粘附蛋白(E-cad)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、RhoA及Rock1、肌球蛋白磷酸酶靶亚基(MBS)蛋白磷酸化表达水平.结果 染尘组中染尘剂量为50、100、200 mg/mL时E-cad表达水平分别为1.34±0.60、1.21±0.17和1.01±0.30,而对照组E-cad表达水平为1.54±0.14;RhoA沉默染尘组中染尘剂量为50、100、200 mg/mL时E-cad表达水平分别为1.79±0.12、1.50±0.11和1.19±0.05,而RhoA沉默组E-cad表达水平为2.21±0.38;染尘组与对照组、RhoA沉默染尘组与RhoA沉默组比较,均显示染尘组E-cad表达水平降低,而α-SMA、collagen Ⅰ、RhoA、Rock1以及MBS蛋白磷酸化表达水平增加;且随着染尘浓度增加,差异越明显.经siRNA沉默后,RhoA沉默染尘组较染尘组E-cad的表达增加,而α-SMA、collagen Ⅰ、RhoA、Rock1的表达降低.结论 SiO2粉尘会导致支气管上皮细胞发生EMT,hoA/Rock信号通路介导EMT参与了矽肺纤维化,抑制该信号通路可以抑制EMT,从而对矽肺纤维化具有保护作用.
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