人NKG2A、CD94的基因克隆和真核共表达载体的构建

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目的构建真核共表达载体pNKG2A-IRES-CD94。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NKG2A、CD94基因,分别克隆pMD-NKG2A、pMD-CD94,对克隆基因进行DNA序列分析。pMD-CD94经XbaⅠ和SalⅠ酶切,插入相应酶切的真核表达载体pIRES(多克隆位点B),NKG2A经XhoⅠ和MluⅠ酶切,插入相应酶切的pIRES-CD94(多克隆位点A)。结果扩增的DNA片段和预期的人NKG2A和CD94大小一致;DNA序列分析显示,克隆的基因序列和GenBank数据库中人NKG2A和CD94基因序列一致。酶谱分析显示,NKG2A和CD94正向插入表达载体pIRES。结论成功构建了含人NKG2A和CD94的真核共表达质粒pNKG2A-IRES-CD94,为研究NKG2A和CD94基因的功能奠定了基础。
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