【摘 要】
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目的:探讨黄芪甲苷(ASTⅣ)与三七总皂苷(NTS)配伍联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠神经修复和血管新生的影响.方法:大鼠随机分为假手术组,模型组,ASTⅣ配伍NTS低、高剂量组,骨髓间充质干细胞(BMSCs)输注组,BMSCs输注联合黄芪甲苷和三七总皂苷低(10,25 mg·kg-1),高(20,50 mg·kg-1)剂量组.全骨髓贴壁法分离、纯化BMSCs,流式细胞术检测BMSCs表面标志物CD29,CD90,CD34,CD45阳性表达率.采用大脑中动脉阻塞建立局灶性脑缺血模型.BMSCs输注组
【机 构】
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湖南中医药大学中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室,细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室,长沙410208
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目的:探讨黄芪甲苷(ASTⅣ)与三七总皂苷(NTS)配伍联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠神经修复和血管新生的影响.方法:大鼠随机分为假手术组,模型组,ASTⅣ配伍NTS低、高剂量组,骨髓间充质干细胞(BMSCs)输注组,BMSCs输注联合黄芪甲苷和三七总皂苷低(10,25 mg·kg-1),高(20,50 mg·kg-1)剂量组.全骨髓贴壁法分离、纯化BMSCs,流式细胞术检测BMSCs表面标志物CD29,CD90,CD34,CD45阳性表达率.采用大脑中动脉阻塞建立局灶性脑缺血模型.BMSCs输注组尾静脉注射PKH26标记的BMSCs(1次/d);联用组尾静脉注射BMSCs(1次/d)并灌胃给药(2次/d);其他组灌胃给药,2次/d;假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水.Longa法测定神经功能缺损症状,红四氮唑(TTC)染色测定脑梗死率、免疫荧光法观察BMSCs移植后的存活及向血管的分化[PKH26/血管内皮生长因子(VEGF)的双阳性表达],蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血管生成素l(Angl)和转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达.结果:成功分离培养BMSCs,表面标志物CD29,CD90,CD34,CD45鉴定符合BMSCs特征.脑缺血后出现神经功能缺损症状,模型组神经功能缺损评分显著升高(P＜0.01),脑梗死率显著增高(P＜0.01),各药物及细胞移植均能不同程度减轻上述病理改变,其中效应最强为BMSCs输注联合高剂量ASTⅣ+NTS组(P＜0.01),优于单用药物和单用BMSCs输注.脑缺血后脑血管损伤,输注BMSCs后,细胞可在缺血侧脑组织存活并促进血管新生,药物联合可增强其效应.脑缺血后,Ang1和TGF-β1的表达增加,效应最强为BMSCs输注联合ASTⅣ+NTS组(P＜0.01),优于单用药物和单用BMSCs输注.结论:ASTⅣ配伍NTS能促进骨髓间充质干细胞移植的存活,靶向修复脑缺血后受损血管促进血管新生,机制可能与改善脑缺血后脑内局部微环境,促进移植干细胞的存活和分化有关.
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