【摘 要】
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目的:探讨miR-106b-5p对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制.方法:实时荧光定量PCR检测miR-106b-5p在CRC组织与相应的癌旁组织、永生化的肠上皮细胞以及肠癌细胞中的表达量;CCK8实验检测DLD1细胞增殖能力;细胞划痕实验检测DLD1细胞的迁移能力;Transwell实验检测DLD1细胞的侵袭能力;生物信息学预测miR-106b-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)
【机 构】
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上海交通大学医学院附属仁济医院,上海 200127
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目的:探讨miR-106b-5p对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制.方法:实时荧光定量PCR检测miR-106b-5p在CRC组织与相应的癌旁组织、永生化的肠上皮细胞以及肠癌细胞中的表达量;CCK8实验检测DLD1细胞增殖能力;细胞划痕实验检测DLD1细胞的迁移能力;Transwell实验检测DLD1细胞的侵袭能力;生物信息学预测miR-106b-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)是miR-106b-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-106b-5p与CCND1之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中CCND1的蛋白表达水平.结果:与癌旁组织相比较,miR-106b-5p在结直肠癌组织中表达量降低(P<0.05);与永生化的肠上皮细胞相比较,miR-106b-5p在结直肠癌细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8、细胞划痕实验以及Transwell实验表明,在DLD1细胞中,过表达miR-106b-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);运用Starbase数据库预测miR-106b-5p下游靶基因为CCND1,miR-106b-5p作用于CCND1的3\'-UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与RNA结合蛋白免疫沉淀实验验证了miR-106b-5p与CCND1之间的相互作用;CCND1在结直肠癌组织与细胞中明显高表达(P<0.05),在DLD1细胞中过表达miR-106b-5p明显抑制CCND1的表达(P<0.05).结论:miR-106b-5p在CRC组织和细胞中表达降低,miR-106b-5p通过抑制CCND1表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭.
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