【摘 要】
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目的 三碘甲状腺原氨酸(T3)具有促进皮肤伤口愈合的能力,但其作用机制需要深入探讨.文中旨在探讨T3对H2O2诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)氧化应激损伤的保护作用,及其与核转录因子类红细胞-2因子(Nrf2)信号通路的关系.方法 取对数生长期HaCaT细胞,采用500 μmol/L H2O2处理HaCaT细胞2h以诱导氧化损伤,同时加入不同浓度的T3(1、0.5、0.1 nmol/L)和(或)Nrf2抑制剂ML385干预,将细胞分为9组:正常组(未进行任何干预)、H2O2组(仅用H2 O2造模)
【机 构】
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646000泸州,西南医科大学基础医学院解剖学教研室;646000泸州,西南医科大学基础医学院继续教育学院
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目的 三碘甲状腺原氨酸(T3)具有促进皮肤伤口愈合的能力,但其作用机制需要深入探讨.文中旨在探讨T3对H2O2诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)氧化应激损伤的保护作用,及其与核转录因子类红细胞-2因子(Nrf2)信号通路的关系.方法 取对数生长期HaCaT细胞,采用500 μmol/L H2O2处理HaCaT细胞2h以诱导氧化损伤,同时加入不同浓度的T3(1、0.5、0.1 nmol/L)和(或)Nrf2抑制剂ML385干预,将细胞分为9组:正常组(未进行任何干预)、H2O2组(仅用H2 O2造模)、ML385组(在用H2O2诱导细胞前,先用含20 μmol/L ML385处理细胞2h)、1 nmol/L T3组(H2O2诱导2h后,在含1 nmol/L T3培养液内培养24 h)、0.5nmol/L T3组(H2O2诱导2h后,在含0.5 nmol/L T3培养液内培养24h)、0.1 nmol/L T3组(H2 O2诱导2h后,在含0.1 nmol/L T3培养液内培养)、ML385+1 nmol/L T3组(20 μmol/L ML385诱导+1 nmol/L T3)、ML385+0.5 nmol/L T3组(20 μmol/L ML385诱导+0.5 nmol/L T3)、ML385+0.1 nmol/L T3组(20 μmol/L ML385诱导+0.1 nmol/L T3).应用MTT法和划痕实验分别检测细胞活性和面积修复率;ELISA法和比色法检测细胞上清中氧化应激相关指标(MDA、ROS、GSH、CAT和SOD)和炎症相关因子(IL-6和TNF-α)的含量;Western blot检测细胞内Nrf2和HO-1蛋白表达.结果 1 nmol/L T3组、0.5 nmol/L T3组和0.1 nmol/L t3组的细胞活性明显高于H2O2组(P＜0.05).ML385+1 nmol/L L组细胞活性较1nmol/L T3组明显降低(P＜0.05),ML385+0.5 nmol/L T3组细胞活性较0.5nmol/L T3组明显降低(P＜0.05),ML385+0.1 nmol/L T3组细胞活性较0.1 nmol/L T3组明显降低(P＜0.05).细胞划痕实验所示,培养20 h,H2O2组和ML385组的面积修复率[(28.99±3.86)％、(26.27±2.00)％]显著低于正常组[(89.67±12.88)％],差异有统计学意义(P＜0.05);1 nmol/L T3组、0.5 nmol/L T3组和0.1 nmol/L T3组面积修复率较H2O2组明显增高(P＜0.05);ML385+1 nmol/L T3组较1 nmol/L T3组、ML385+0.5 nmol/L T3组较0.5 nmol/L T3组、ML385+0.1 nmol/L T3组较0.1 nmol/L T3组面积修复率显著降低(P＜0.05).与正常组比较,H2O2组MDA、ROS水平及炎症因子IL-6和TNF-α水平升高(P＜0.05),而抗氧化物GSH、CAT和SOD水平降低(P＜0.05).ML385+1 nmol/L T3组较1 nmol/L T3组、ML385+0.5 nmol/L T3组较0.5 nmol/L T3组、ML385+0.1 nmol/L T3组较0.1 nmol/L T3组MDA、ROS、IL-6和TNF-α水平明显升高(P＜0.05),GSH、CAT和SOD水平降低(P＜0.05).结论 T3减轻了H2O2诱导的氧化及炎性损伤,可能是通过激活Nrf2介导的抗氧化信号通路起作用.
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