【摘 要】
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羰基还原酶不对称还原前手性酮生成相应的手性醇,广泛应用于手性药物、农业化学品和液晶材料等结构复杂的化合物的合成.本实验室自有羰基还原酶Ch KRED03催化3,5-二（三氟甲基）苯乙酮、1-苯基-2-丙烯基-1-酮类、N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮（NBPO）等底物具有优异的立体选择性和良好的活力,但是该酶较低的热稳定性不利于其进一步应用.因此采用蛋白质工程的方法提高其热稳定性.利用FireProt在
【机 构】
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中国科学院成都生物研究所中国科学院环境与应用微生物重点实验室环境微生物四川省重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（21708038）资助~~；
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羰基还原酶不对称还原前手性酮生成相应的手性醇,广泛应用于手性药物、农业化学品和液晶材料等结构复杂的化合物的合成.本实验室自有羰基还原酶Ch KRED03催化3,5-二（三氟甲基）苯乙酮、1-苯基-2-丙烯基-1-酮类、N-叔丁氧羰基-3-哌啶酮（NBPO）等底物具有优异的立体选择性和良好的活力,但是该酶较低的热稳定性不利于其进一步应用.因此采用蛋白质工程的方法提高其热稳定性.利用FireProt在线工具和序列一致性原理预测了该酶热稳定相关氨基酸位点,通过理性选择8个位点,构建了单点突变体并识别了4个有益突变位点,进一步将其整合得到了热稳定性大幅度提高的组合突变体M8314（T183V/N188L/A211P/S224P）.该突变体最适反应温度为40℃,比野生型Ch KRED03提高了10℃,其催化底物NBPO的活性是野生型的116%. M8314在40℃的热失活半衰期为52 h,是野生型的200倍.本研究成功提高了羰基还原酶Ch KRED03的热稳定性,增加了该酶工业化应用的潜力,所采用的分子进化策略也为其他酶的热稳定性改造提供了思路.（图6表3参40）
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