【摘 要】
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目的通过克隆脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因启动子,确定其活性核心区和功能片段,分析心血管疾病独立危险因子同型半胱氨酸(Hcy)对FABP4启动子活性的影响。方法应用生物信息学预
【机 构】
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宁夏医科大学药学院; 宁夏医科大学总医院骨科; 宁夏医科大学基础医学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(No:81560084);宁夏自然科学基金(No:NZ16063);宁夏高等学校科学研究项目(No:NGY2016087)
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目的通过克隆脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因启动子,确定其活性核心区和功能片段,分析心血管疾病独立危险因子同型半胱氨酸(Hcy)对FABP4启动子活性的影响。方法应用生物信息学预测FABP4基因启动子区顺式转录作用元件和反式作用因子,以pGL3-Basic为载体,采用基因重组法构建启动子截取片段,转染HEK-293A细胞,观察不同截取片段的荧光素酶活性变化,确定活性最强的片段。进一步将核心启动子片段(-2000/-1)转染巨噬细胞,观察不同浓度Hcy和DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)对FABP4基因启动子活性的影响。结果不同长度截取片段转染HEK-293A细胞后检测荧光素酶活性结果显示,与pGL3对照组比较,-2000/-1片段转录活性最强。将核心启动子片段(-2000/-1)转染巨噬细胞并用不同浓度Hcy干预后,与0μmol/L Hcy组比较,100和200μmol/L Hcy组启动活性升高;与100μmol/L Hcy组比较,在100μmol/L Hcy基础上用AZC干预后,FABP4基因启动活性升高(P <0.05)。结论成功克隆FABP4启动子的4个片段,且确定FABP4基因核心启动子位于-2000/-1片段;Hcy可以促进FABP4基因核心启动子片段活性,补充AZC后可以进一步促进Hcy引起的FABP4启动子活性升高。
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