【摘 要】
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目的 探讨人转化铁受体基因(hTfR)克隆和高效表达的方法及临床意义.方法用RT-PCR法从人胚肝、肺组织中克隆hTfR基因,构建重组表达质粒pcDNA3-hTfR和pEGFP-C1-hTfR,转染人胚肾上皮HEK293细胞.用Western印迹法检测pcDNA3-hTfR转染HEK293细胞后hTfR蛋白的表达情况;用荧光显微镜和共聚焦荧光显微镜观察重组pEGFP-C1-hTfR质粒转染HEK2
【机 构】
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510060,广州,华南肿瘤学国家重点实验室,中山大学肿瘤防治中心影像介入中心,广州医学院实验医学研究中心,510060,广州,华南肿瘤学国家重点实验室,中山大学肿瘤防治中心影像介入中心,广州军区总医
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目的 探讨人转化铁受体基因(hTfR)克隆和高效表达的方法及临床意义.方法用RT-PCR法从人胚肝、肺组织中克隆hTfR基因,构建重组表达质粒pcDNA3-hTfR和pEGFP-C1-hTfR,转染人胚肾上皮HEK293细胞.用Western印迹法检测pcDNA3-hTfR转染HEK293细胞后hTfR蛋白的表达情况;用荧光显微镜和共聚焦荧光显微镜观察重组pEGFP-C1-hTfR质粒转染HEK293细胞后hTfR蛋白的表达水平及亚细胞定位.结果经过DNA测序证实,克隆的hTfR基因为全长cDNA序列(2332 bp).Western印迹法检测到转染细胞能有效表达190×103的hTfR蛋白,荧光显微镜和共聚焦荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白(GFP)-hTfR融合蛋白主要定位于细胞膜.结论从人胚肝、肺组织中可以成功克隆hTfR基因,该基因转染HEK293细胞后可获得hTfR蛋白的高效表达.hTfR主要定位于细胞膜。
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