【摘 要】
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利用毕赤酵母GS115表达系统,成功表达并纯化获得了两种Kex2蛋白酶突变体Kex2-K291L和Kex2-K291H.对比研究了天然Kex2蛋白酶和这两种突变体的酶学性质和稳定性.实验结果表明,与天然Kex2蛋白酶相比,Kex2-K291H和Kex2-K291L两种突变体的稳定性得到了明显的改善.两种突变体的最适pH和最适温度与天然Kex2蛋白酶保持一致,均为pH 9.0和37℃,两种突变体的温度稳定性也与天然Kex2蛋白酶基本一致.与天然Kex2蛋白酶相比,突变体Kex2-K291H的pH值稳定性范围
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237;上海雅心生物技术有限公司,上海 200231
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利用毕赤酵母GS115表达系统,成功表达并纯化获得了两种Kex2蛋白酶突变体Kex2-K291L和Kex2-K291H.对比研究了天然Kex2蛋白酶和这两种突变体的酶学性质和稳定性.实验结果表明,与天然Kex2蛋白酶相比,Kex2-K291H和Kex2-K291L两种突变体的稳定性得到了明显的改善.两种突变体的最适pH和最适温度与天然Kex2蛋白酶保持一致,均为pH 9.0和37℃,两种突变体的温度稳定性也与天然Kex2蛋白酶基本一致.与天然Kex2蛋白酶相比,突变体Kex2-K291H的pH值稳定性范围从5.0～6.0扩大至5.0～7.0.蛋白酶促反应动力学研究表明,突变体Kex2-K291H和Kex2-K291L的Kcat/Km值分别为天然Kex2蛋白酶的1.85倍和2.05倍.突变体Kex2-K291H和Kex2-K291L在改善天然Kex2蛋白酶自降解问题的同时,提高了pH稳定性和催化效率.
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