【摘 要】
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背景:三花接骨散为临床骨折筋伤常用药,使用效果良好,但缺少相关实验学依据,其作用机制尚不明确。目的:观察三花接骨散对成骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响。方法:首先预实验筛选三花接骨散干预成骨细胞的最佳浓度,之后采用CCK-8法进行成骨细胞增殖实验,碱性磷酸酶检测成骨细胞成熟度,RT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白、胶原酶Ⅰ、Axin2、Dkk4、Le
【基金项目】
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湖南中医药大学横向课题:三花接骨散促骨形成细胞/分子生物学机制研究～～；
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背景:三花接骨散为临床骨折筋伤常用药,使用效果良好,但缺少相关实验学依据,其作用机制尚不明确。目的:观察三花接骨散对成骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响。方法:首先预实验筛选三花接骨散干预成骨细胞的最佳浓度,之后采用CCK-8法进行成骨细胞增殖实验,碱性磷酸酶检测成骨细胞成熟度,RT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白、胶原酶Ⅰ、Axin2、Dkk4、Lef-1、Tcf-1 mRNA表达,Western blot法检测β-Catenin、P-β-Catenin蛋白表达。结果与结论:（1）成骨细胞培养5 d后,10 mg/L质量浓度时成骨细胞数量最多;（2）成骨细胞培养21 d后,三花接骨散不同浓度组的细胞增殖数量均有增加,以10 mg/L组明显,但20 mg/L已有减少的趋势;（3）成骨细胞培养7 d后,三花接骨散低、中、高剂量组碱性磷酸酶表达均有增加,以高剂量组（20 mg/L）明显;（4）成骨细胞培养7 d后,三花接骨散低、中、高剂量组碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白,骨桥蛋白,胶原酶ⅠmRNA表达均有增加,以高剂量组（20 mg/L）明显;（5）成骨细胞培养21 d后,三花接骨散低、中、高剂量组Axin2、Dkk4 mRNA表达均有降低,Lef-1、Tcf-1 mRNA表达增加,以高剂量组（20 mg/L）明显;（6）成骨细胞培养21 d后,三花接骨散低、中、高剂量组P-β-Catenin蛋白表达均有降低,β-Catenin蛋白表达增加,均以高剂量组（20 mg/L）明显;（7）提示三花接骨散可调控成骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路,促进碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白、胶原酶Ⅰ、Lef-1、Tcf-1 mRNA以及β-Catenin蛋白表达,降低Axin2、Dkk4 mRNA以及P-β-Catenin蛋白表达,促进成骨细胞的增殖,这可能是其促进骨折愈合的作用机制。
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