探讨乌司他丁(ulinastatin,UTI)上调P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达对百草枯(paraquat,PQ)诱导HK-2细胞损伤的保护作用及机制。
方法实验分为两部分。第一部分实验分为正常对照组、PQ组、UTI+PQ组、UTI对照组。第二部分实验分为阴性病毒组(包含对照组、PQ组、PQ+UTI组、UTI组)和P-gp siRNA组(包含对照组、PQ组、PQ+UTI组、UTI组)。阴性病毒组:细胞转染空白病毒;P-gp siRNA组:细胞转染携带P-gp siRNA的病毒。常规培养HK-2细胞,在800 μmol/L PQ干预后,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HK-2细胞内P-gp表达量。并以携带P-gp沉默基因的慢病毒技术抑制P-gp表达,应用细胞活性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率;Western blot法检测病毒转染后的P-gp的表达量;高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测细胞内PQ浓度。
结果与正常对照组比较,PQ组细胞内P-gp的表达量无明显变化;与PQ组比较,UTI+PQ组细胞内P-gp的表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与相应阴性病毒组比较,P-gp siRNA组细胞存活率无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性病毒+PQ组比较,P-gp siRNA+PQ组细胞内PQ浓度无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);与P-gp siRNA+PQ组比较,P-gp siRNA+PQ+UTI组细胞内PQ含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论UTI在体外能明显减少PQ诱导的HK-2细胞损伤,提高HK-2细胞的存活率,但可能与其上调P-gp的表达关系不大。