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背景
氧诱导视网膜病变(OIR)动物模型的视网膜铺片是缺血性视网膜病变研究的有用工具。OIR大鼠或小鼠的幼鼠视网膜面积小且厚，采用传统方法先剪开视网膜再进行铺片实际操作难度较大，影响了对实验结果的定量分析。
目的探讨一种易操作、稳定性好的鼠视网膜铺片联合免疫荧光染色技术。
方法采用随机数字表法将40只出生后<6 h的SD大鼠随机分为OIR模型组和正常对照组，OIR模型组幼鼠与母鼠一起以24 h的时间间隔交替在体积分数80%高氧环境或21%常氧环境中喂养14 d，正常对照组大鼠在常氧环境中喂养。于喂养至14 d时摘除眼球并剥离视网膜，对完整的视网膜先行谷氨酰胺合成酶(GS)-isolectin B4染色，然后展平视网膜铺片并呈放射状切为4瓣，并于荧光显微镜下拍照，应用Adobe Photoshop CS3图像分析软件系统进行图像拼接处理，获得全视网膜血管图像，采用软件测量每张完整视网膜铺片图像中无血管区及整个视网膜的像素值，最后计算无血管区的像素百分比进行无灌注区严重程度分析。
结果采用先行视网膜血管免疫荧光染色再放射状切开视网膜的方法可见视网膜结构完整，展开的视网膜铺片平整，视网膜全周均可见锯齿缘结构。视网膜血管呈强的绿色荧光，血管分支清晰可见，而视网膜的背景绿色荧光较弱。正常对照组大鼠视网膜铺片显示其血管基本发育完全，OIR模型组大鼠视网膜铺片可显示中央视盘旁无毛细血管区及周边大片无血管区形成。
结论采用先行视网膜血管免疫荧光染色再放射状切开视网膜的方法制备视网膜铺片简便、易行，较传统的视网膜铺片法更容易确保视网膜结构的完整性，有利于OIR模型视网膜血管形态学的观察和分析。