【摘 要】
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基于探针底物法,将蚯蚓微粒体悬浮液加入至含有混合探针底物香豆素(50μmol·L-1)、安非他酮(25μmol·L-1)、阿莫地喹(50μmol·L-1)、右美沙芬(5μmol·L-1)的孵育体系中(微粒体蛋白质量浓度需控制在32～96 mg·L-1内),于37℃孵育20 min后,加入甲醇终止反应,静置10 min后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定对应的代谢物7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的生成量.根据相应代谢物的生成量分别评价蚯蚓CYP2A6、CYP2B
【机 构】
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重庆市农业科学院 农业质量标准与检测技术研究所,重庆 401329
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基于探针底物法,将蚯蚓微粒体悬浮液加入至含有混合探针底物香豆素(50μmol·L-1)、安非他酮(25μmol·L-1)、阿莫地喹(50μmol·L-1)、右美沙芬(5μmol·L-1)的孵育体系中(微粒体蛋白质量浓度需控制在32～96 mg·L-1内),于37℃孵育20 min后,加入甲醇终止反应,静置10 min后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定对应的代谢物7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的生成量.根据相应代谢物的生成量分别评价蚯蚓CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8及CYP2D6酶活力.采用Acquity UPLC HSS T3柱作为分离柱,以不同体积比的含1 mmol·L-1乙酸铵的0.05％(φ)甲酸溶液和甲醇的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱,串联质谱中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式检测,并用基质匹配法配制混合标准溶液系列.结果显示:7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的质量浓度均在2.5～50μg·L-1内与其对应的峰面积呈线性关系;对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为73.7％～103％,日内相对标准偏差(RSDs,n=5)为2.1％～11％,日间RSDs(n=5)为4.6％～10％.方法用于分析分别暴露于多壁碳纳米管染毒土壤(暴露组)和普通土壤(对照组)21 d后蚯蚓体内4种CYP同工酶的活力,CYP2C8酶活力明显高于CYP2A6、CYP2B6及CYP2D6,暴露组中CYP2A6及CYP2C8酶活力显著(P<0.05)高于对照组,而CYP2B6及CYP2D6酶活力与对照组的无显著性差异,因此推测可将CYP2A6及CYP2C8作为一套生物标记物,用于定性诊断土壤的多壁碳纳米管污染.
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