【摘 要】
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为了克隆奶牛Oct4基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生逆转录病毒质粒pMSCV-Oct4的包装细胞株。我们以50~60日龄的胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR的方法扩增出牛Oct4
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院,河南省农业科学院畜牧兽医研究所
【基金项目】
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国家高技术研究与发展计划(863)项目(2005AA21905), 教育部重大项目(03160)资助
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为了克隆奶牛Oct4基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生逆转录病毒质粒pMSCV-Oct4的包装细胞株。我们以50~60日龄的胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR的方法扩增出牛Oct4基因全序列,全长为1083bp与GenBank公布的序列的同源性为99.4%。将其插入到逆转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,获得重组逆转录病毒质粒pMSCVneo-Oct4。鉴定正确后,通过Lipofectamine2000将其转导入包装细胞PT67,用含有G418的培养液进行抗性筛选,获得阳性细胞克隆。细胞
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