分子信标实时荧光定量PCR构绵羊PrP基因质粒和标准曲线

来源 :中国人兽共患病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tk6014
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目的为能够用实时荧光定量PCR研究消化系统PrPmRNA的表达水平,构建目的基因PrP的标准品质粒和标准曲线。方法根据GenBank中绵羊基因编码区保守序列,设计特异性引物和分子信标探针;提取总RNA,经反转录、RT—PCR后,提取质粒,PCR-SSCP及测序鉴定,获得ARQ质粒;将质粒梯度稀释,进行荧光定量PCR,获得标准曲线及回归方程。结果结果显示,本实验设计的分子信标具有特异性强、灵敏度高和结果准确的特性;标准曲线相关系数r。=0.999,表明线性关系好,成功构建了目的基因的标准品质粒和标准曲线。
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