【摘 要】
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目的：构建人胰腺α-淀粉酶（HPA）真核表达载体并在毕赤酵母中进行表达。方法：从人胰腺组织中提取总RNA，逆转录为cDNA，RT-PCR法扩增HPA基因，将其插入到酵母分泌性表达质粒pPIC9中，筛选
【机 构】
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北京大学第一医院检验科,北京大学第三医院检验科
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目的：构建人胰腺α-淀粉酶（HPA）真核表达载体并在毕赤酵母中进行表达。方法：从人胰腺组织中提取总RNA，逆转录为cDNA，RT-PCR法扩增HPA基因，将其插入到酵母分泌性表达质粒pPIC9中，筛选得到正确序列的重组质粒pPIC9-HPA，用该质粒转化毕赤酵母菌GS115，PCR方法筛选阳性克隆，摇瓶培养、0．5％甲醇诱导重组HPA分泌性表达，测定培养上清中的淀粉酶活力；重组HPA用冷乙醇-糖原亲和沉淀、疏水层析纯化并以SDS-PAGE电泳和Western blot方法鉴定。结果：成功构建了重组HPA真
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