基于mTOR信号通路探讨鹿茸多肽对大鼠退变椎间盘髓核细胞自噬的影响

来源 :中华中医药学刊 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jishunhui
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目的:探讨鹿茸多肽(pilose antler polypeptides,PAP)对大鼠退变椎间盘髓核细胞自噬的影响。方法:购入1月龄的60只健康SD大鼠,随机分为正常(normal)、对照(control)、鹿茸多肽(PAP)、雷帕霉素(Rapamycin,Rap)、鹿茸多肽+雷帕霉素(PAP+Rap)5组,每组12只。后四组采用双前肢去势直立法复制大鼠腰椎间盘退变模型。造模6周后,正常组普通饲养不做任何处置,对照组用0.9%氯化钠注射液灌胃, 鹿茸多肽组用4.5mg/mL浓度的鹿茸多肽灌胃,雷帕霉素组腹腔注射0.2mg/mL浓度的雷帕霉素,鹿茸多肽+雷帕霉素组腹腔注射0.2mg/mL浓度的雷帕霉素联合4.5mg/mL浓度的鹿茸多肽灌胃,各组均给药8周。给药结束后,5组中,半数样本取L5/6椎间盘及上下相邻椎体,用10%的甲醛溶液固定后使用苏木精-伊红染色和阿利新蓝染色进行切片染色,显微镜下观察;另半数样本取完整L5/6椎间盘组织,经液氮罐速冻后移入-80℃冰箱冻存,Western-Blot检验AKT-mTOR信号通路相关蛋白p-mTOR、p-AKT和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。结果:Alcian Blue染色及苏木精-伊红染色下,与对照组比较,PAP组、Rap组、PAP+Rap组均可显著延缓椎间盘退变。蛋白质印迹法检测p-AKT、p-mTOR的表达水平排列为:PAP+Rap>PAP>control>Rap,(P<0.05);LC3-Ⅱ的表达水平排列为:Rap>PAP+Rap>control>PAP,(P<0.05);LC3-Ⅱ/Ⅰ的比例排列为:Rap>PAP+Rap>control>PAP,(P<0.05)。结论:鹿茸多肽具有抑制大鼠椎间盘髓核细胞自噬的作用,进而延缓大鼠椎间盘退变,这可能与激活mTOR信号通路有关。
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