【摘 要】
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目的 构建三维预血管化微组织，探索三维共培养体系中人成纤维细胞(human fibroblasts,HFs对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）出芽和迁移的促进作用。方法 取HUVECs和HFs培养传代至3～5代进行实验。在二维共培养体系中，将HFs行PKH26染色且固定细胞密度后，与HUVECs以不同比例（1∶4、1∶1、
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
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目的 构建三维预血管化微组织，探索三维共培养体系中人成纤维细胞(human fibroblasts,HFs对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）出芽和迁移的促进作用。方法 取HUVECs和HFs培养传代至3～5代进行实验。在二维共培养体系中，将HFs行PKH26染色且固定细胞密度后，与HUVECs以不同比例（1∶4、1∶1、4∶1）以及不同接种方式（两种细胞间隔48 h顺序接种、直接混合接种）共培养，荧光显微镜下观察血管网络形成情况。构建三维共培养体系，通过慢病毒转染分别用绿色和红色荧光蛋白标记HUVECs和HFs，将标记细胞接种于多孔微载体上，采用转瓶动态培养，分别制备HF微组织、HUVEC微组织、HF-EC微组织和HF＆EC微组织；低渗结晶紫染色法观测微组织中细胞生长情况。将各微组织包埋于纤维蛋白凝胶中，激光共聚焦显微镜下观察HF微组织和HUVEC微组织中细胞生长贴附情况，4种微组织出芽情况以及HF-EC微组织、HF＆EC微组织芽体细胞组成、出芽数量及芽体长度。制备HFs条件培养基，观察其对HUVEC微组织出芽的影响，以正常培养基培养作为对照。结果 二维共培养时HFs预培养有助于血管网状结构形成与稳定，且当两种细胞比例为1∶1时效果最佳。三维共培养时各微组织上细胞生长良好，HUVEC微组织无出芽，HF微组织、HF-EC微组织、HF＆EC微组织均能出芽，具备良好血管化能力。HF-EC微组织芽体长度及出芽数目均优于HF＆EC微组织（P＜0.05）。共培养微组织中HF微组织先于HUVEC微组织出芽，两者出芽轨迹一致，芽体由HFs和HUVECs组成。在HFs条件培养基中，HUVEC微组织也能出芽。结论 在转瓶中按1∶1比例顺序接种HFs和HUVECs可制备HF-HUVEC预血管化微组织，且在三维共培养中HFs能够引导和促进HUVECs出芽及迁移。
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